[硕士论文] 昆虫细胞BTI-Tn5B1-4及其克隆株的无血清培养和特性的研究 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-昆虫细胞BTI-Tn5B1-4及其克隆株的无血清培养和特性的研究，共48页，28237字

摘要

本论文以 Sf-9为对照，对目前国际上广泛应用的 BTI-Tn5B1-4细胞及其克隆株

H5CL-G和 H5CL-F分别进行了无血清驯化和培养，比较了细胞系在无血清培养基

Sf-900Ш和有血清培养基TNM-FH中的细胞形态、生长速率、病毒产量和重组蛋白表达

水平，主要结果如下：

1、在Sf-900Ш中，细胞形态都发生了改变，BTI-Tn5B1-4和H5CL-G的梭形细胞比

例都有不同程度的下降，细胞变的短而粗，圆形细胞比例增加，细胞略变大。H5CL-F

的梭形细胞完全变为圆形细胞，直径为16.65 ±1.36 μm，而在TNM-FH中梭形细胞比例为

94.6%，大小为57.49 ± 1.85 μm×14.15± 2.40 μm，圆形细胞比例为5.4%，直径为15.59±

1.26μm。Sf-9细胞比在TNM-FH培养的略大。

2、细胞在两种培养基的生长曲线测定显示，BTI-Tn-5B1-4、H5CL-G、H5CL-F和

Sf-9在Sf-900Ш中生长速度快，倍增时间短，群体倍增时间分别为18.5 h、18.8 h、19.0 h

和21.7 h，而在TNM-FH中它们的群体倍增时间分别为21.9 h、21.69 h、21.87 h和25.4 h。

3、用AcMNPV-1A病毒分别对两种培养基中的BTI-Tn-5B1-4、H5CL-G和H5CL-F细

胞进行侵染。结果表明，细胞系在两种培养基的病毒感染率都在90%以上，多角体产量

两种培养基间无明显差异。细胞系BTI-Tn-5B1-4、H5CL-G和H5CL-F在Sf-900Ш中的多

角体产量大约为Sf-9在TNM-FH的2~3倍。

4、重组蛋白 β-半乳糖苷酶（ β-galactosidase）和碱性磷酸酶（ secreted alkaline

phosphatase，SEAP）的表达测定，结果表明，两种培养基间的β-半乳糖苷酶表达量在细

胞系BTI-Tn-5B1-4和Sf-9均无明显差异；细胞系H5CL-G和H5CL-F在Sf-900Ш中表达量高

于在TNM-FH的表达量，其中H5CL-F在Sf-900Ш中表达量最高（4.08×104 IU/ml），大约

为它在TNM-FH的表达量的2.55倍。四种细胞系的碱性磷酸酶在Sf-900Ш中的表达量明

显高于在TNM-FH中的表达量，其中BTI-Tn-5B1-4在Sf-900Ш的表达水平最高（3.90

IU/ml），大约为H5CL-G、H5CL-F和Sf-9在TNM-FH表达量的3~5倍。

关键词：昆虫细胞；无血清培养；生长曲线；病毒产量；蛋白表达

目录

中文摘要...........Ⅰ

英文摘要..........Ⅱ

1 前言............1

1.1 昆虫细胞系的建立......1

1.2 昆虫细胞的改良......2

1.3 昆虫细胞培养基.....3

1.4 昆虫细胞培养的应用................9

1.5 立题依据及其目的意义.............12

2.材料与方法..13

2.1 材料......13

2.2 试验方法 .............13

2.2.1 细胞培养基的制备......13

2.2.2 毒源的制备...........………………...14

2.2.3 细胞的传代培养...........15

2.2.4 细胞的无血清培养和驯化...............15

2.2.5 细胞冻存与复苏.........15

2.2.6 细胞形态观察和大小的测量....16

2.2.7 细胞生长曲线的测定...........16

2.2.8 病毒侵染和病毒产量的测定....16

2.2.9 碱性磷酸酶（SEAP）和 β-半乳糖苷酶（β-gal）的表达.........16

3 结果与分析........18

3.1 细胞的无血清培养和驯化....18

3.2 细胞的形态比较..............18

3.3 细胞冻存与复苏...............20

3.4 细胞生长曲线和群体倍增时间的测定.................20

3.5 病毒的侵染和产量.........22

3.6 β-半乳糖苷酶（β-gal）的表达.........24

3.7 碱性磷酸酶（SEAP）的表达...........26

4 讨论.............28

5 结论....31

参考文献.............32

附录...................37

致谢.........38

硕士期间发表的学术论文....39

导师组意见..40

学位论文独创性声明及学位论文版权使用授权书....41

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