[硕士论文] 牛乳中甘油三酯sn-2位脂肪酸组成的测定方法研究 [复制链接]

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硕士论文-牛乳中甘油三酯sn-2位脂肪酸组成的测定方法研究，共70页，39508字

摘 要

甘油三酯是牛乳脂肪的最主要成分，约占 95%~98％。牛乳脂肪对婴幼儿的

营养价值与脂肪酸在甘油三酯上的位置分布有关，研究表明 sn-2 棕榈酸能够促

进婴幼儿的营养吸收。因此研究牛乳甘油三酯 sn-2 脂肪酸组成的测定方法显的

非常重要。但目前对甘油三酯 sn-2 位脂肪酸组成方面的研究较少。主要是用酶

或化学试剂水解甘油三酯后，采用薄层色谱法分离得到单甘油酯，再对其脂肪酸

组成进行气相色谱分析。用薄层色谱法费时费力还容易分离不完全，导致试验结

果不准确。

本试验期望通过研究建立快速、准确测定牛乳甘油三酯 sn-2 位脂肪酸组成

的方法。胰脂酶具有专一水解甘油三酯 sn-1 和 sn-3 位置上的脂肪酸的性质，试

验中利用胰脂酶水解牛乳甘油三酯得到 sn-2 单甘油酯和游离脂肪酸，再对 sn-2

单甘油酯进行衍生，最后用气相色谱质谱联用法对 sn-2 脂肪酸组成进行分析。

通过对样品处理方法和气相色谱分析条件的研究，得出以下结果：色谱柱 Rtx-5

和 sp2560 均可用于甘油三酯总脂肪酸组成的测定，气相色谱仪的分流比设定为

1:100；分析甘油三酯 sn-2 位脂肪酸组成时，采用 Rtx-5 色谱柱效果最佳，程序

升温条件为从 100℃以 8℃/min 升至 210℃，保持 21.25min，分流比设定为 1:1；

胰脂酶水解甘油三酯时，最佳取样量为 0.03g，水解时间为 5min，胰脂酶用量为

500U/g。

试验中采用蒸发光散射高效液相色谱法分离 sn-2 位单甘油酯时方法的回收

率达到 84.4%~88.1%，准确方便快捷，省去了传统测定中费时费力的薄层色谱分

离步骤。用气相色谱质谱联用法分析牛乳甘油三酯 sn-2 位脂肪酸组成的结果表

明，牛乳甘油三酯 sn-2 位脂肪酸由 2.57%月桂酸、7.68%豆蔻酸、34.74%棕榈酸、

11.56%亚油酸、22.53%油酸和 15.21%硬脂酸组成。

关键词： 牛乳脂肪; 甘油三酯;

sn-2 位脂肪酸;

蒸发光散射高效液相;

气相色谱质谱联用

目录

中文摘要 ．．．．1

英文摘要 ．．．．．2

符号和缩略词说明．．．．．．３

第一章 绪论．．４

1.1 脂肪及脂肪酸的生理功能研究进展…………..…………..4

1.1.1 油脂的生理功能…………………………….……………4

1.1.2 脂肪酸的生理功能.……5

1.1.2.1 饱和脂肪酸的生理功能………………………..………5

1.1.2.2.单不饱和脂肪酸（MUFA）的生理功能……..………8

1.1.2.3 多不饱和脂肪酸（PUFA）的生理功能….……………8

1.1.2.4.功能性多不饱和脂肪酸对胎儿和婴儿的作用.………9

1.2 棕榈酸在甘油三酯上的位置分布对婴儿营养吸收的影响…………………………..……10

1.3 甘油三酯脂肪酸组成的测定方法研究进展………..……13

第二章 标准甘油三酯 sn-2 位脂肪酸组成的测定方法研究．．．．．．．15

引言…………………………15

2.1 试验材料、试剂与仪器………………………………..…15

2.1.1 试验材料…………...…15

2.1.2 药品与试剂…………………………...…………………15

2.1.3 仪器设备…...…………16

2.2 试验方法…..……………17

2.2.1 甘油三酯总的脂肪酸组成的测定……..……….………17

2.2.2 甘油三酯 sn-2 位脂肪酸的测定方法…….….…………18

2.2.2.1 胰脂酶水解甘油三酯18

2.2.2.2 薄层层析分离单甘油酯………………………………18

2.2.2.3 蒸发光散射高效液相分离单甘油酯…………………18

2.2.2.4 单甘油酯的甲酯化…19

2.2.2.5 蒸发光散射高效液相色谱条件……………………..19

2.3 结果与讨论…………….20

2.3.1 测定结构油脂的总脂肪酸组成时相关条件的确定………………..……………………20

2.3.1.1 取样量的确定………20

2.3.1.2 甲酯化条件的确定…20

2.3.1.3 色谱柱的选择………20

2.3.1.4 分流比的确定………22

2.3.1.5 加样回收率试验……23

2.3.1.6 结构油脂脂肪酸组成的定性…………………………24

2.3.1.7 结构油脂脂肪酸组成的定量…………………………24

2.3.2 测定甘油三酯的 sn-2 位脂肪酸组成时相关条件的确定……………………..…………26

2.3.2.1 胰脂酶水解条件的确定………………………………26

2.3.2.1.1 取样量的确定.……26

2.3.2.1.2 反应时间的确定……………………….……………26

2.3.2.1.3 胰脂酶用量的确定………………….………………27

2.3.2.2 薄层层析点样量的确定…………………………….. 27

2.3.2.3 薄层层析时展开条件的确定…………………………28

2.3.2.4 HLPE - ELSD 条件的优化……………………………28

2.3.2.4.1 HLPE - ELSD 漂移管温度的选择……………………………… ……………………28

2.3.2.4.2 流动相配比的选择…………………………….……29

2.3.2.5 色谱柱的选择………31

2.3.2.6 Rtx-5 色谱柱柱温的选择…………………….………33

2.3.2.7 分流比的选择……………………………...……….…37

2.3.2.8 sn-2 位脂肪酸的定性………………………...….……37

2.3.2.8.1 质谱定性….………37

2.3.2.8.2 标准样品法定性………………………….…………38

2.3.2.9 sn-2 位脂肪酸的定量38

2.3.2.10 回收率的测定…..…40

2.4 小结…………….……… 40

第三章 牛乳脂肪甘油三酯 sn-2 位脂肪酸组成的测定方法研究．．．41

引言………….….……..……41

3.1 试验材料、试剂与仪器. 41

3.1.1 试验材料………...……41

3.1.2 药品与试剂……...……41

3.1.3 仪器设备……….…..…42

3.2 试验方法…………..……43

3.2.1 牛乳脂肪的提取……………………………..…….……43

3.2.2 牛乳脂肪甘油三酯总的脂肪酸组成的测定……..….…43

3.2.3 牛乳脂肪甘油三酯 sn-2 位脂肪酸的测定方法.….……44

3.2.3.1 胰脂酶水解甘油三酯44

3.2.3.2 HPLC-ELSD 分析甘油三酯水解产物………………44

3.2.3.3 HPLC-ELSD 法回收单甘油酯………………………44

3.2.3.4 单甘油酯的甲酯化…45

3.2.3.5 气相色谱和气质联用分析 sn-2 脂肪酸组成…………45

3.3 结果与讨论……..………45

3.3.1 牛乳脂肪提取条件的确定………………………...……45

3.3.2 牛乳脂肪总脂肪酸的组成测定结果…………...………45

3.3.3 胰酯酶水解牛乳甘油三酯条件的确定………...………46

3.3.3.1 胰脂酶加入量的确定46

3.3.3.2 反应时间的确定……47

3.3.3.3 牛乳 sn-2 位脂肪酸的定性…………………….….…47

3.3.3.4 牛乳 sn-2 位脂肪酸的定量……………………..….…48

3.3.3.5 加样回收率…………48

3.3.3.6 牛乳脂肪 sn-2 位脂肪酸组成结果分析………..….…49

结论…………………………51

参考文献……………………52

致谢…………………………55

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