[硕士论文] 婴儿配方乳粉中维生素B12检测方法的研究 [复制链接]

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硕士论文-婴儿配方乳粉中维生素B12检测方法的研究，共61页，32019字

摘 要

目的：维生素 B12 又称氰钴胺素。主要存在于动物性食品中，深红色针状晶体，结构性

质稳定。它是维持正常造血功能、促进机体生长、保持神经系统功能的必需维生素，对

人体健康具有重要作用。维生素 B12 在食品中的含量很低。婴儿配方乳粉根据其类母乳

化食品的要求，需要添加符合国家要求含量的维生素 B12。本文论述了近年来维生素 B12

检测方法的研究现状，分析了各种检测方法的特点，并根据实际检验需要和婴儿配方乳

粉的特点对维生素 B12 检测方法进行了研究。研究出了高效液相色谱紫外检测与荧光检

测两种不同的方法。

方法：婴儿配方乳粉的基质复杂，本文针对其特点对样品的前处理方法进行了大量的实

验研究，探索出了以弱酸缓冲液除杂蛋白，固相萃取柱净化提取液，高纯氮气吹扫浓缩

维生素 B12 为主要特点的实验方法，为高效液相色谱的检测提供了条件。而在荧光检测

中，为使维生素 B12 具有荧光性，需要在前处理中对其进行衍生转化，主要采用强碱热

处理，裂解分子结构，产生具有荧光性的α—核唑磷酸。本文对色谱条件进行了摸索，

提出了一套新的而又切实可用的色谱检测方法。在高效液相紫外检测方法研究中：采用

BDS HYPERSIL C18 色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），以水-乙腈为流动相；流速 0.25ml/min，

检测波长 361nm，柱温 40℃。洗脱梯度： 0-10min，乙腈在流动相中的比例为 10%；

10-35min，乙腈的比例线性升到 30%。在高效液相荧光检测的方法研究中：采用 C18 MG

色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-磷酸缓冲盐为流动相；流速 1ml/min，检测波

长 250/312nm，柱温 25℃。洗脱梯度：0-5min，乙腈在流动相中的比例为 10%；5-30min，

乙腈的比例线性升到 15%。

结果：紫外检测方法：维生素 B12的检出限为 20ng/ml，线性范围在 0.0505～3.232μg/ml，

重复性实验的 RSD%为 2.5289%，回收率在 92.23%-96.68%，相对标准偏差（RSD）为 2.04%。

荧光检测方法：维生素 B12的检出限为 50ng/ml，线性范围在 0.075525～4.8336μg/ml，

重复性实验的 RSD%为 8.626%，回收率在 86.37%-92.68%，相对标准偏差（RSD）为 2.68%。

本文探索并优化了实验条件，将维生素 B12 在不同固相萃取柱与色谱柱上的保留特性进

行了比较研究，定性定量分析了乳粉中的维生素 B12。在对数种婴儿配方乳粉的检验中取

得了满意的效果。这两种检测方法高效、快捷，满足了婴儿配方乳粉中维生素 B12 检测

的实际需要，达到了实验目的。同时，在大量实践中，本文对色谱检测技术有了深的认

识，提出了不同以往的看法，认为低流速能够解决某些物质出峰过低，峰型不好的问题。

另外实验中也发现了许多问题，包括维生素 B12 存在形式的细分研究、其他化学物质的

影响作用，样品前处理的改进，亲和免疫吸附柱的使用等等，都有待进一步的研究。

关键词：维生素 B12；婴儿配方乳粉；检测方法；高效液相

目

录

摘要…..……ⅰ

Abstrct...…ⅱ

第 1 章 前言……..………………..1

1.1 维生素 B12研究概况……….…1

1.1.1 理化性质和结构......1

1.1.2 维生素 B12的存在与分布….2

1.1.3 日摄入量…………………..2

1.1.4 代谢过程…………………..3

1.1.5 生理功能…………………..4

1.1.6 维生素 B12的缺乏与疾病…5

1.1.7 维生素 B12吸收抗性………6

1.1.8 国内外检测方法研究现状..7

1.2 本研究的目的、意义和内容.11

第 2 章 高效液相紫外检测婴儿配方乳粉中维生素 B12的方法研究………………..………………..12

2.1 引言….12

2.2 材料与方法……..…………..12

2.2.1 仪器……………….12

2.2.2 试剂.12

2.2.3 溶液的配制……………….12

2.2.4 方法.13

2.3 结果与讨论………………….14

2.3.1 样品前处理条件的确定.…………...…......15

2.3.2 色谱分析条件的确定……………………..20

2.3.3 方法的适用性分析…………….....………25

2.4 小结………..………………....30

第 3 章 高效液相荧光检测婴儿配方乳粉中维生素 B12的方法研究………………….…………..…..31

3.1 引言….31

3.2 材料与方法…………………..31

3.2.1 仪器…………..……………31

3.2.2 试剂……………......31

3.2.3 方法……………......31

3.3 结果与讨论.………………….32

3.3.1 样品前处理………………..32

3.3.2 维生素 B12衍生转化……… 32

3.3.3 色谱分析条件的确定…………………………..34

3.3.4 方法的适用性分析………..37

3.4 小结…..41

第 4 章 总结和展望………………42

4.1 两种分析方法的比较………..42

4.2 本研究的主要结论…………..42

4.3 研究的创新点………………...44

4.4 研究的前景思考与展望……..44

参考文献…..45

致谢………..49

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