[硕士论文] 毛皮动物病原菌耐药基因TEM-1和GyrA的核酸探针检测 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-毛皮动物病原菌耐药基因TEM-1和GyrA的核酸探针检测，61页，39402字

摘 要

随着毛皮动物养殖业的不断发展，毛皮动物细菌病的危害日趋突出，几乎每个养殖

场都发生过细菌病,给毛皮动物养殖业带来巨大的经济损失。目前，流行的细菌病主要

是大肠杆菌病、巴氏杆菌病、绿脓杆菌病和肠杆菌病等。兽医临床大量应用抗菌药物来

防治细菌病，且多不合理用药，导致毛皮动物致病菌耐药株不断增多，耐药谱不断扩大，

药物防治效果越来越差，给临床筛选抗菌药物和针对性治疗带来了困难，严重影响了毛

皮动物养殖业的进一步发展。

本研究通过调查山东省和安徽省部分地区毛皮动物细菌病流行现状，从患病动物组

织分离鉴定病原菌，结合细菌药敏试验，了解其耐药性。同时，扩增耐药基因 TEM-1

和 gyrA，并制备地高辛标记的核酸探针，用该探针对毛皮动物病原菌分离株进行斑点杂

交检测，明确耐 β-内酰胺类病原菌和耐氟喹诺酮类大肠杆菌在毛皮动物中的携带情况。

本研究从患病毛皮动物共分离到致病菌 51 株，通过生化反应鉴定，大肠杆菌 14

株（27.5%），金黄色葡萄球菌 8 株（15.7%），肠杆菌 7 株（13.7%），变形杆菌 6 株

（11.8%），巴氏杆菌 4 株（7.8%），枸橼酸杆菌 3 株（5.9%），绿脓杆菌 3 株（5.9%），

嗜血杆菌 2 株（3.9%），耶尔森氏菌 2 株（3.9%），志贺杆菌 1 株（2.0%），肺炎双球

菌 1 株（2.0%）。

42 株革兰氏阴性菌通过 K-B 法筛选出 34 株耐 β-内酰胺类细菌，占细菌分离株的

80.95%。大肠杆菌耐喹诺酮类细菌 8 株，占大肠杆菌分离株的 57.14%。药敏试验的结

果显示，半数以上细菌对磷霉素钠、先锋 V、头孢噻肟钠、庆大霉素、硫酸链霉素敏感，

对氨苄西林、青霉素、四环素、林可霉素表现出耐药性。

分别针对耐药基因 TEM-1 和 gyrA 设计引物，进行 PCR 扩增，产物大小分别为 301bp

和 169bp。对耐药基因片段进行地高辛标记，制备核酸探针，对此探针进行标记效率、

特异性、敏感性的检测。用地高辛标记的 TEM-1 基因片段作为核酸探针，对 42 株革兰

氏阴性致病菌进行斑点杂交，检出 38 株耐 β-内酰胺类菌株，阳性率为 90.48%。用地高

辛标记的 gyrA 基因片段作为核酸探针，对 14 株大肠杆菌临床分离株进行斑点杂交，检

出 7 株耐氟喹诺酮类大肠杆菌，阳性率为 50%。

本研究证实，毛皮动物细菌病耐药严重且多重耐药，应该引起兽医工作者的足够重

视。本研究建立了毛皮动物病原菌对 β-内酰胺类药物及氟喹诺酮类药物耐药性的核酸探

针检测方法，可以同时对大量样本进行检测，为临床合理使用抗菌药，有效防治毛皮动

物细菌病奠定了技术基础。

关键词：毛皮动物细菌病；TEM-1 基因；gyrA 基因；耐药性；核酸探针；斑点杂交

目录

摘要Ⅰ

英文摘要………………Ⅲ

缩略语表………………Ⅴ

第一章 文献综述………1

第二章 试验研究……15

前言15

试验一 毛皮动物病原菌的分离、鉴定及耐药性分析 …...… … …… 16

1 材料与方法…………16

2 结果与分析…………18

3 讨论…………………22

试验二

斑点杂交检测毛皮动物病原菌的 TEM-1 基因….…24

1 材料与方法…………24

2 结果与分析…………32

3 讨论…………………35

试验三 斑点杂交检测大肠杆菌的 GyrA 基因 …........… ………………37

1 材料与方法…………37

2 结果与分析…………39

3 讨论…………………42

结论43

创新点…………………44

参考文献………………45

资料文件预览：
共1文件夹，1个文件，文件总大小：1.39MB，压缩后大小：542.90KB

• 硕士论文-毛皮动物病原菌耐药基因TEM-1和GyrA的核酸探针检测
• 硕士论文-毛皮动物病原菌耐药基因TEM-1和GyrA的核酸探针检测.doc  [1.39MB]