[硕士论文] 猪圆环病毒2型核酸疫苗研究 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-猪圆环病毒2型核酸疫苗研究，共80页，41814字

摘 要

猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）属于圆环病毒科，是一种小的，无囊膜的单

链负股环状DNA病毒。分为无致病性的PCV1和有致病性的PCV2两个基因型。断奶仔猪

多系统衰竭综合征（PMWS）、猪呼吸道病综合征(PRDC)、猪皮炎和肾病综合征(PDNS)

均可以从感染组织中分离到猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)，给养猪业所造成的直接和间接危害

巨大。其中PCV2的ORF2基因被认为与免疫原性有关，被作为核酸疫苗研制的候选基因。

CpG motifs的免疫佐剂作用成为目前免疫增强剂研究的热点之一，有报道称可以人为增

加核酸疫苗骨架中CpG的数目来进一步提高核酸疫苗的免疫效果。

本研究人工合成系列含有1～24个长度不等、序列不同的CpG-ODN基序，经MLuI

单酶切、连接后插入到已构建好的真核表达载体pVAX1-ORF2的骨架结构中，经酶切及

测序证实所构建的系列真核表达载体正确，成功构建系列含有CpG-ODN的表达ORF2编

码蛋白的重组质粒pVAX1-ORF2-CpG，为进一步优化和筛选最佳猪圆环病毒核酸疫苗打

下基础。

将已构建好的上述系列真核表达载体 CpG-pVAX1-ORF2 分别对同等条件下 PCV2

抗原抗体阴性的猪进行免疫接种，并对其免疫原性进行了检测。通过 ELISA 法检测了

猪圆环病毒抗体水平，猪外周血白介素-2 水平，PCR 法检测抗原。试验结果表明：所构

建的系列核酸疫苗对猪体均有一定不同程度的的免疫刺激作用，各项检测指标显示其中

含有 14 个 CpG 的核酸疫苗 9 周后抗体水平达到最高，含 6 个 CpG 的核酸疫苗 9 周后

IL-2 水平达到最高。

通过动物试验选取免疫效果较好的试验组及对照组部分猪只进行攻毒保护性试验，

通过临床症状，体温变化，攻毒后第3天、第7天、第13天前腔静脉采血抗体抗原（pcv2

全长）检测，病毒分布和血液中的病毒血症情况，各组织器官的病理变化及病理组织学

检查等指标检测发现含14个CpG基序的核酸疫苗的猪临床表现和体温变化最轻微，病毒

血症存在时间最短，组织器官损伤最小（特别是对肾的损伤最小），说明该核酸疫苗能

够有效地抵抗PCV2病毒并在第13天清除。

综上：本研究在前期筛选的对猪具有最强免疫刺激活性的CpG-ODN的基础上，将

优选的 CpG-ODN插入到 pVAX1-ORF2中，构建了系列含有长度不等、序列不同的

CpG-ODN基序的核酸疫苗，并在猪体试验中筛选出几种免疫效果较好的疫苗，在进一

步的攻毒保护性试验中，发现含14个CpG基序的核酸疫苗可以有效地抵抗PCV2病毒并

及时清除，对猪圆环病毒核酸疫苗的研制打下良好基础。

关键词：猪圆环病毒；真核表达载体pVAX1-ORF2-CpG；核酸疫苗；攻毒保护

目录

中文摘要……………ⅰ

英文摘要……………… iii

英文缩略词…………… v

前言……………… 1

文献综述……………… 3

试验一 含 CpG 基序的 PCV2 ORF2 真核表达载体的构建………… 24

1.1 材料与方法…… 2 4

1 .2 结果与分 析 … ………… …………  28

1.3 讨论…………… 3 0

试 验二 含 C pG 基序 猪圆环病 毒核 酸疫 苗猪 体免 疫试 验… ………… ……… 33

2 .1 材 料与方法 … ………… …… 33

2.2 结果与分析…… 37

2.3 讨论…………… 41

试验三 含 CpG 基序猪圆环病毒核酸疫苗攻毒保护性试验……………… 4 4

2 .1 材 料与方法 … ………… …… 44

2.2 结果与分析…… 47

2.3 讨论……………… 5 4

结论… 5 5

参考文献……………… 5 6

附录… 6 6

攻读硕士期间发表的论文……………… 6 8

致谢… 6 9

导师组意见…………… 7 0

学位论文独创性声明… 7 1

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