[硕士论文] 奶牛乳腺干细胞的体外分离培养及鉴定研究 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-奶牛乳腺干细胞的体外分离培养及鉴定研究，共62页，34860字

摘 要

目的：

体外分离培养奶牛 MaSCs，研究其生物学特性，并对其进行体外扩增和鉴定，开辟

奶牛乳腺疾病治疗的新途径，为乳腺生物反应器的制备提供种子细胞。

方法：

本试验分为三个部分：试验一分离 MaSCs，并进行原代和传代培养纯化，绘制其生

长曲线和瑞氏-吉姆萨（RS-GMS）染色来研究其生物学习性，并对细胞进行冻存和复苏。

试验二取 6 月龄和 18 月龄奶牛乳腺组织分离培养 MaSCs，比较其生长特点及增殖能力。

试验三对分离培养并传代纯化的 MaSCs 通过碱性磷酸酶（AKP）染色、染色体核型分

析和 αs1-酪蛋白基因和 k-酪蛋白基因的 PCR 扩增来进行鉴定。

结果：

1．本试验应用贴壁筛选法成功分离得到奶牛 MaSCs，体外培养到第 12 代，细胞数

量扩增到 5000 倍以上。本试验分离得到的奶牛 MaSCs 具有干细胞的典型特征：外形呈

多角形、长梭形或椭圆形，细胞核质比较大、胞浆中细胞器少、核仁明显。奶牛 MaSCs

具有快速增殖能力，细胞形态均一，排列有序，体外培养 12 代细胞活性仍无变化。

2. 6 月龄组牛 MaSCs 增殖能力、贴壁能力、培养形成的细胞集落数均高于 18 月龄

组。

3．瑞氏-吉姆萨（RS-GMS）染色证明奶牛 MaSCs 各代之间形态较一致，绝大多数

细胞为典型的成纤维样，细胞呈漩涡状排列，细胞形态以梭形为主，有少量小圆形细胞

和大而扁的细胞。

4. 碱性磷酸酶（AKP）染色细胞呈阳性，证明所得细胞为比较原始的细胞。

5. 奶牛 MaSCs 核型分析表明该细胞具有正常核型，该细胞状态稳定，体外培养条

件下没有发生恶化。

6. 奶牛 MaSCs αs1-酪蛋白扩增的产物经琼脂糖凝胶电泳检测，得到一条长 1736bp

的片段，k-酪蛋白基因酪蛋白基因扩增出一条长度为 780bp 的目的条带，扩增片段特异

性良好，无杂带出现，目的片段的大小与预期结果相吻合。

综上所述，本试验分离得到的奶牛 MaSCs 的确为比较原始的细胞，根据形态特征、

增殖能力、及鉴定试验基本证明该细胞为奶牛 MaSCs。

关键词：奶牛；乳腺；干细胞；增殖；鉴定

目 录

中文摘要. ⅰ

英文摘要. ⅲ

缩略符号. ⅴ

文献综述... 1

1 综述前言....... 1

2 干细胞及研究进展. 2

2.1 干细胞 2

2.2 胚胎干细胞.. 3

2.3 成体干细胞.. 5

3 乳腺细胞的研究进展......... 8

4 乳腺干细胞的研究现状及进展 ... 9

4.1 乳腺细胞的类型和干细胞的鉴定 ...... 9

4.2 乳腺干细胞的分离........ 10

4.3 乳腺干细胞的培养........ 11

4.4 乳腺干细胞的永生化问题...... 12

4.5 乳腺干细胞和肿瘤干细胞...... 12

4.6 乳腺干细胞与乳腺再生的关系 ........ 12

4.7 乳腺干细胞的研究与乳腺生物反应器 ...... 14

5 总结与展望... 16

研究内容 ....... 17

1 奶牛 MaSCs 的分离培养及生物学特性的研究 .. 17

1.1 试验材料和方法.. 17

1.2 试验方法.. 18

1.3 结果与分析........ 20

1.4 讨论 22

2 不同月龄奶牛 MaSCs 的生物学特性比较 26

2.1 试验材料和方法 26

2.2 试验方法.... 27

2.3 结果与分析 28

2.4 讨论.. 31

3 奶牛 MaSCs 的鉴定试验 ........ 34

3.1 试验材料和方法 34

3.2 试验方法.... 35

3.3 试验结果.... 36

3.4 讨论.. 39

结论... 41

参考文献. 42

附录... 46

致谢... 49

资料文件预览：
共1文件夹，1个文件，文件总大小：1.54MB，压缩后大小：845.64KB

• 硕士论文-奶牛乳腺干细胞的体外分离培养及鉴定研究
• 硕士论文-奶牛乳腺干细胞的体外分离培养及鉴定研究.doc  [1.54MB]