[硕士论文] 仔猪腹泻多病原卵黄抗体制备及稳定性研究 [复制链接]

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硕士论文-仔猪腹泻多病原卵黄抗体制备及稳定性研究，共66页，41677字

摘 要

卵黄抗体是近年来的一个研究热点，用于多种疾病的预防和治疗，是一种有良好发

展前途的生物制剂。本试验成功制备了针对仔猪腹泻的多病原卵黄抗体，并对卵黄抗体

效价变化规律、分离提取方法、喷雾干燥条件及卵黄粉的稳定性进行了初步研究，试验

结果如下所述。

1 卵黄抗体效价变化规律的研究

以引起仔猪腹泻的常见病原大肠杆菌（K88、K99、987P）和传染性胃肠炎病毒、

流行性腹泻病毒为抗原，免疫蛋鸡，定期检测卵黄抗体滴度，得出卵黄抗体滴度变化规

律：首次免疫抗原后 7d 可检测到抗体存在，但抗体滴度较低，随后抗体滴度缓慢升高，

第 2 次免疫和第 3 次免疫后，抗体滴度有个小幅的下降，随后迅速升高，第 3 次免疫后

12d，抗体滴度达到峰值，维持 30d 后抗体滴度逐渐下降。

2 卵黄抗体分离提取方法比较

从对卵黄的去脂效果、提取液的蛋白含量、提取的抗体纯度和对抗体活性的影响等

方面，综合比较了酸化水法、聚乙二醇法、氯仿法和水-辛酸法 4 种分离提取卵黄抗体

的方法，结果显示水-辛酸法效果最好，此种方法提取的抗体脂肪残留量较低、抗体产

率高达 6.8mg/mL、纯度 93.6%，明显优于其它 3 种提取方法。

3 卵黄粉的制作及稳定性研究

研究了在卵黄中添加不同保护剂及其不同添加比例，喷雾干燥进出口温度对卵黄抗

体的影响，结果显示：在卵黄中添加乙醇溶解邻苯二甲酸丙甲基纤维素和淀粉，进口温

度 145℃，出口温度 70℃的条件制备的卵黄粉品质最好。

为研究卵黄粉的稳定性，本试验采用温度梯度、pH 梯度及保存条件作为影响卵黄

粉中抗体的外部因素，对卵黄抗体稳定性进行了初步研究，结果显示：卵黄粉中抗体对

温度稳定性良好，在 70℃以下卵黄抗体性质稳定，90℃时抗体活性迅速下降；pH 低于

4.0，抗体开始失活，pH 1.5 时活性残余 30%；卵黄粉在 4℃存放 6 个月，抗体活性保持

不变，25℃存放 6 个月，活性开始丢失。说明卵黄粉具有耐酸、耐碱，易于保存等优点。

关键词：鸡；仔猪；腹泻；卵黄抗体；分离提取；稳定性

目 录

摘 要 .............. I

ABSTRACT II

符号说明 ..... IV

前 言 ..............1

文献综述 ........3

1 卵黄抗体的研究概况 ...3

1.1 卵黄抗体的形成 ........3

1.2 卵黄抗体结构及生物学特性 ......4

1.3 卵黄抗体稳定性 ........5

1.4 卵黄抗体作用机理 ....5

1.5 卵黄抗体的提取方法 6

1.6 卵黄抗体应用 ............8

1.7 使用卵黄抗体存在的问题 ..........9

1.8 卵黄抗体的发展前景 9

2 仔猪腹泻的研究 .........10

2.1 病毒性腹泻 ..............10

2.2 大肠杆菌性腹泻 ......11

2.3 仔猪腹泻的防治现状 ................11

研究目的及意义 ............13

试验一 卵黄抗体滴度的消长规律 ................14

1 材料 ...........14

2 方法 ...........16

2.1 抗原的制备 ..............16

2.2 检测用抗原的制备 ..19

2.3 试验动物及处理 .....20

2.4 卵黄抗体的提取纯化 ................21

2.5 卵黄抗体效价的检测 ................22

3 结果与分析 .................24

3.1 猪流行性腹泻病毒的培养 ........24

3.2 病毒毒价检测 ..........24

3.3 检测用抗原最适浓度结果确定 25

3.4 卵黄抗体的变化规律 ................26

4 讨论 ...........30

试验二 卵黄抗体分离提取方法的研究 ........32

1 材料 ...........32

2 方法 ...........32

2.1 卵黄的制备 ..............32

2.2 卵黄抗体不同分离方法 ............32

2.3 卵黄抗体的纯化 ......33

2.4 不同方法提取卵黄抗体的效果比较 ..........33

3 结果与分析 .................35

4 讨论 ...........37

4.1 酸化水法 .................37

4.2 聚乙二醇法 .............38

4.3 氯仿法 ...38

4.4 水-辛酸法................38

试验三 卵黄粉的制作及温度、PH 值和储存条件对抗体活性的影响............39

1 材料 ...........39

2 方法 ...........39

2.1 卵黄粉的制作工艺 ..39

2.2 温度对卵黄粉中抗体活性的影响 ..............40

2.3 pH 值对卵黄粉中抗体活性的影响............41

2.4 储存条件对卵黄粉中抗体活性的影响 ......41

3 结果与分析 .................41

3.1 卵黄粉制作工艺的研究 ............41

3.2 温度对卵黄粉中抗体活性的影响 ..............43

3.3 pH 值对卵黄粉中抗体活性的影响............44

3.4 储存条件对卵黄粉中抗体活性的影响 ......44

4 讨论 ...........45

4.1 卵黄粉的制备工艺 ..45

4.2 温度对卵黄粉中抗体活性的影响 ..............45

4.3 pH 值对卵黄粉中抗体活性的影响............46

4.4 储存条件对卵黄粉中抗体活性的影响 ......46

结 论 ............47

参考文献 ......48

致 谢 ............51

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