[硕士论文] 鸭瘟病毒AV1221株UL24基因的克隆与原核表达 [复制链接]

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硕士论文-鸭瘟病毒AV1221株UL24基因的克隆与原核表达，共51页，24365字

摘 要

将鸭瘟强毒 AV1221 株一百倍稀释，接种 12 日龄鸭胚绒毛尿囊腔，增殖病毒。根

据 GenBank 中已发表鸭瘟弱毒株序列，设计合成四条引物，以病毒 DNA 为模板，用 PCR

方法，分段扩增 UL24-TK（414bp）、UL24-25（1813bp）基因片段，并用巢式 PCR 进

行目的 DNA 的筛选。将扩增得到的基因克隆到 pMD18-T 载体上，经蓝白斑和 PCR 鉴

定筛选出阳性克隆进行序列测定，用生物学软件将所测序列进行编辑，然后将其与弱毒

序列和其它 α-疱疹病毒进行比较。结果显示：鸭瘟病毒 AV1221 株 UL24 基因 ORF 全

长为 1230bp，编码 409 个氨基酸，与参考序列比较，核苷酸同源性为 99.8%，有三个核

苷酸位点发生变异，氨基酸的同源性为 99.8%，仅有一个核苷酸位点发生变异，与禽疱

疹病毒的亲缘性较近。上述结果表明，UL24 基因在不同毒株间高度保守。

用生物学软件分析 UL24 蛋白的抗原性选取其中一段抗原性较好的区域，命名为

UL24-1，重新设计一对引物，引物两端有 EcoliⅠ和 HindⅢ酶切位点，采用 PCR 方法克

隆该片段。将所得的片断插入 pET-32a(+)载体，构建重组质粒，重组质粒经 PCR 和酶切

鉴定为阳性后，转化入宿主菌 Ecoli BL21。IPTG 诱导表达，经 SDS-PAGE 分析表明，

在 33KD 处出现了与预期大小相符的目的条带。对表达蛋白做可溶性分析，证实该蛋白

主要以包涵体形式存在。

关键词：鸭瘟病毒；UL24 基因；PCR；原核表达

目 录

中文摘要……Ⅰ

英文摘要……… ………… … …… …… Ⅱ

缩略符号 ………… ………… …… ……Ⅲ

前言 1

1.立体依据及意义 … … … … … … … … … … 1

2.文献综述 … … … … … … … … … … … 1

2.1 病 原学研究进展 … … … … … … 1

2.2 检测技术研究进展 … … … … … … … 5

2.3 疫苗研制 … … … …… … … … 7

试验部分 … …… … … …… … … 9

1. 鸭瘟病毒 AV1221 株 UL24 基因的克隆及序列分析…9

1.1 材料 ……9

1.2 方法 ……9

1.3 结果与分析……… …15

1.4 讨论……21

2. 鸭瘟病毒 AV1221 株 UL24 基因片断的原核表达……23

2.1 材料……23

2.2 方法……23

2.3 结果与分析……… …28

2.4 讨论……31

结论…………33

参考文献……34

附录…………37

致谢…………41

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