[硕士论文] 鸭瘟病毒的分离鉴定 [复制链接]

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硕士论文-鸭瘟病毒的分离鉴定，共46页，29411字

摘 要

本实验通过鸭胚尿囊腔接种，对从山东采集的疑似鸭瘟的病鸭肝组织进行了

病毒分离，获得病毒分离株。接种鸭胚，收集死亡鸭胚液进行了病毒的负染、电

镜观察。经形态学、理化特性、生物学特性、致病性、抗原性和分子生物学特性

测定表明该病毒为不耐酸、不耐碱、不耐热、对氯仿处理敏感、核酸类型为双股

DNA 的有囊膜病毒，直径为 120-200nm。

此分离株对 10 日龄鸭胚的致死率为 100%，人工感染 15 日龄雏鸭的致死率

为 100%。不同品种、不同日龄患该病病死鸭的肉眼病变基本一致，主要表现为

肝脏、胰脏、脾脏、肾脏和肠道粘膜出血。通过人工感染雏鸭可成功复制出与自

然感染病例相同或相近的肉眼病变及组织学病变。

此外，本实验用鸭胚成纤维细胞培养了该病毒，并详细观察了此病毒引起的

细胞病变。

临床上，可根据该病的典型临床症状和剖检病变做出初步诊断。本试验建立

了 PCR 诊断方法，目的片段大小为 228bp，为临床上快速诊断鸭瘟提供了一种检

测方法。

关键词：鸭瘟病毒

分离鉴定

聚合酶链式反应（PCR）

目录

中文摘要 1

英文摘要 2

缩写词表 3

文献综述 4

试验一 疑似鸭瘟病毒的分离培养 …………………18

1 材料与方法 …………………18

1.1 材料18

1.2 方法18

1.2.1 病料处理………………18

1.2.2 鸭胚的接种与传代……19

1.2.3 鸭胚成纤维细胞的培养与接毒………………19

1.2.4 病毒的电镜观察………20

1.2.5 动物回归实验…………20

1.2.6 兔抗疑似鸭瘟抗血清的制备…………………20

2 结果 …………………21

2.1 鸭胚的接种与传代………21

2.2 鸭胚成纤维细胞的培养及接毒…………………22

2.3 电镜观察…………………23

2.4 动物回归实验……………23

2.5 疑似鸭瘟病毒抗血清的制备……………………26

3 讨论…26

试验二 疑似鸭瘟病毒的生物学特性 ………………27

1 材料与方法 …………………27

1.1 材料27

1.2 方法27

1.2.1 鸭胚半数致死量的测定27

1.2.2 对不同动物红细胞的血凝性…………………27

1.2.3 氯仿的敏感性试验………27

1.2.4 酸敏感性试验……………28

1.2.5 热灭活试验………………28

1.2.6 血清交叉定性中和试验…28

2 结果 ……………………28

2.1 疑似鸭瘟病毒ELD50的测定…28

2.2 对不同细胞的血凝性………29

2.3 氯仿的敏感性试验…………30

2.4 酸敏感试验…………………30

2.5 热灭活试验…………………30

2.6 血清交叉定性中和试验……30

3 讨论……30

试验三 PCR 技术诊断鸭瘟病毒 31

1 材料与方法 ……………………31

1.1 材料…31

1.2 方法…32

1.2.1 引物设计…………………32

1.2.2 鸭瘟病毒基因组的提取…32

1.2.3 PCR 扩增特异性片断……32

1.2.4 扩增出的特异性片断的回收……………………33

2 结果 ……………………33

2.1 228BP 特异性片断的扩增… 34

2.2 测序结果……………………34

3 讨论……35

结论……35

参考文献…36

致谢

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