[硕士论文] 北沙参种子质量标准的制定及RAPD分子标记鉴别的研究 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-北沙参种子质量标准的制定及RAPD分子标记鉴别的研究，共61页，36673字

摘 要

北沙参为多年生草本植物，具有较高的营养、保健及药用价值。因其为异花授粉植

物，野生与栽培群体中存在着丰富的遗传变异，同时由于北沙参药材长期人工栽培，种

子种苗提纯、复壮工作滞后，变异退化，严重影响了道地药材的质量稳定。目前北沙参

的品种分类研究仍限于形态学、解剖学的方法，有关北沙参在 DNA 水平上的分类研究

尚未见报道。本实验以北沙参为材料，从制定种子质量标准、DNA 提取、RAPD 的反

应体系与 PCR 扩增条件建立以及运用 RAPD 技术对北沙参主要栽培品种进行系统聚类

分析，并进行品种种类的划分和分子鉴别方面进行了探讨。

1、本实验通过观察种子的外部形态特征，测定不同产地的北沙参种子净度、千粒

重、含水量、发芽率，并据此初步制订了北沙参种子的质量分级标准。

2、本实验利用北沙参叶片 DNA 来进行 RAPD 分析，共 6 个样品。采用 CTAB 法

从叶片中直接提取 DNA，然后将其溶于 TE 缓冲液中，利用紫外分光光度计法和琼脂糖

凝胶电泳法检测提取样品基因组 DNA 的浓度和纯度。结果表明：所提取的北沙参叶片

基因组 DNA 浓度和纯度都很高，无论在质量上还是完整性上都符合 RAPD 分析的需要。

3、本实验研究了 RAPD 的影响因素，从而确立了一套优化的北沙参 RAPD 反应体

系和 PCR 扩增条件，即模板 DNA32ng/μl，随机引物 1.0μmol/L，dNTPs0.25mmo1/L，

Mg2+2.5mmol/L，Taq 聚合酶 1U。其热力学参数为：94℃预变性 3min，之后进行 40 个

循环（94℃变性 30s，36℃退火 60s， 72℃延伸 90s），最后 72℃延伸 5min，最后 4℃终

止反应。

4、从 40 条 10bp 随机引物中筛选出了 5 条具有多态性且重复性好的引物，对山东

莱阳北沙参 6 个样品进行 RAPD 标记研究，共扩增出 95 个条带，其中多态性条带 90

个，占总扩增条带数的 94.74%，每个引物可扩增出 13~23 条多态性带，平均 18 条。结

果表明，供试样品被聚为两类，这与形态学上的分类（据叶柄颜色分类）有一定程度的

相似性。

关键词：北沙参；种子质量标准；RAPD 标记；分子鉴别

目 录

中文摘要..........?

英文摘要.....П

缩略词表......Ш

文献综述..........1

1 综述前言......1

2 北沙参研究概况..........2

3 RAPD 技术及其在药用植物研究中的应用...............6

研究内容........12

1 北沙参种子品质检验及质量标准制定....12

1.1 试验材料和方法.....12

1.1.1 试验材料..............12

1.1.2 试验方法..............12

1.2 结果与分析.............12

1.2.1 北沙参种子形态观察..........12

1.2.2 北沙参种子净度测定分析..13

1.2.3 北沙参种子千粒重测定......13

1.2.4 北沙参种子含水量测定......13

1.2.5 北沙参种子发芽率测定......15

1.2.6 北沙参种子质量标准的初步制定......17

1.3 讨论.........18

1.3.1 北沙参种子含水量测定......18

1.3.2 北沙参种子发芽率测定......18

1.3.3 北沙参种子质量标准制定..18

2 北沙参叶片基因组 DNA 提取及浓度测定..............20

2.1 试验材料和方法.....20

2.1.1 材料、试剂及仪器..............20

2.1.2 试验方法..............21

2.2 结果与分析.............22

2.2.1 DNA 紫外分光光度计法检测.............22

2.2.2 DNA 琼脂糖凝胶电泳法检测.............23

2.3 讨论.........23

2.3.1 CTAB 法提取 DNA 的可行性分析…..23

2.3.2 实验中应该注意的问题......24

3 北沙参的 RAPD 反应体系及分子标记鉴别..........26

3.1 试验材料和方法.....26

3.1.1 材料、试剂及仪器..............26

3.1.2 试验方法..............26

3.1.3 数据分析方法......27

3.2 结果与分析.............28

3.2.1 反应组分对 RAPD 的影响.28

3.2.2 反应参数对 RAPD 的影响.30

3.2.3 北沙参不同品种的 RAPD 分子鉴别.31

3.3 讨论.........35

3.3.1 影响 RAPD 分析的因素.....35

3.3.2 引物的筛选..........39

3.3.3 RAPD 技术在品种鉴别中的可行性分析...........39

结论........41

参考文献........42

附录........49

致谢........51

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