[硕士论文] PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV复合PCR检测技术的建立和初步应用 [复制链接]

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硕士论文-PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV复合PCR检测技术的建立和初步应用，共75页，37375字

摘 要

猪繁殖障碍病在国内外都有严重发生，已成为大中型猪场最重要的疫病之一，并且

呈全球性分布。我国当前以猪圆环病毒 2 型感染、猪细小病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖

与呼吸综合征、猪瘟造成的猪繁殖障碍最为普遍和严重，特别是这几种病原常混合感染，

可以引起 70% 以上的初产母猪发生流产、产死胎、弱仔，给养猪业造成巨大的经济损

失。

本研究针对猪圆环病毒 2 型 (PCV2)、猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪瘟病毒（CSFV）5 种病原，建立复合 PCR 检

测技术，并用该法对山东省胶东地区的猪场进行检测，从而了解该地区猪繁殖障碍病的

发病情况，为猪场制定合理的免疫程序提供参考。

根据 Genbank 上 PCV2、PPV、PRV、PRRSV 和 CSFV 的已知序列，分别设计并合

成了 5 对特异性扩增引物，建立 PCV2、PPV、PRV、PRRSV 和 CSFV 单项 PCR 检测方

法，分别扩增出预期的 466 bp、759 bp、349 bp、202 bp 和 707bp 片段。对单项 PCR 反

应条件（引物浓度、dNTP 浓度、TaqDNA 聚合酶浓度、退火温度和 PCR 反应程序）进

行优化，筛选出最佳反应条件。

在优化单项 PCR 反应条件基础上，建立了 PCV2-PPV-PRV-PRRSV-CSFV 复合 PCR

检测方法，并对其特异性、敏感性和重复性进行了测定。结果表明：只有特异性引物与

其特异性模板能扩增出预期大小的条带，与其它模板没有任何扩增产物，表明该法特异

性好；最低能检测到 184pg/L 的 PCV2、248pg/L 的 PPV、5.3ng/L 的 PRV、25.6ng/L 的

PRRSV、15.28ng/L 的 CSFV 的核酸模板，表明该法具有较高的敏感性；重复检测 3 次，

其结果均一致，表明重复性好。

采用建立的 PCV2-PPV-PRV-PRRSV-CSFV 复合 PCR 检测方法，对山东省胶东地区

送检的 32 份临床疑似病料进行了 PCR 检测，结果表明：32 份样品中，PCV2、PPV、

PRV、PRRSV 和 CSFV 感染的阳性率分别为 25.00%、0%、34.38%、71.88%和 3.13%；

共检出 25 份阳性病料，阳性率为 78.13%，其中 PRV-PRRSV 双重感染的比例为 31.25%，

PCV2-PRV-PRRSV 三种病原体混合感染的比例为 25.00%。用单项 PCR 检测作对照，结

果两者符合率为 100%，表明该复合 PCR 检测方法具有较高的敏感性，可以进行临床猪

圆环病毒 2 型感染、猪细小病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟的病原学

快速诊断。

关键词：猪圆环病毒 2 型；猪细小病毒；猪伪狂犬病毒；猪繁殖与呼吸综合征病毒；

猪瘟病毒；复合 PCR

目录

摘要…………………Ⅰ

英文摘要……………Ⅲ

缩略词表……………Ⅴ

文献综述……………1

试验部分……………14

前言…………………14

试验一 PCV2、PPV、PRV、PRRSV和 CSFV 单项 PCR 检测方法的建立… … … … … … … … … … … 17

1 材料与方法 ……17

2 结果与分析 ……25

3 讨论 ……………31

试验二 PCV2、PPV、PRV、PRRSV 和 CSFV 复合 PCR 检测方法的建立…34

1 材料与方法 ……34

2 结果与分析 ……35

3 讨论 ……………40

试验三 复合 PCR 检测技术的初步应用………41

1 材料与方法 ……41

2 结果与分析 ……42

3 讨论 ……………44

结论…………………46

参考文献……………47

附录…………………51

致谢…………………64

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• 硕士论文-PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV复合PCR检测技术的建立和初步应用
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