[硕士论文] 绵羊痒病小鼠模型的病理组织学动态观察 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-绵羊痒病小鼠模型的病理组织学动态观察，共77页，36120字

摘 要

传染性海绵状脑病是人和动物的一类慢性、致死性、神经性疾病，是牛海绵状脑病、

绵羊痒病以及人的克雅氏病、库鲁病等疾病的统称。绵羊痒病是最早发现的 TSE，目前

认为绵羊痒病引起了疯牛病，并伴随疯牛病，引起了人类的变异性克雅氏病。因此，绵

羊痒病发病机制及其在体内增值的研究具有重要的意义。

人工脑内感染小鼠痒病 RML、22L 毒株，通过小鼠组织切片制备，经蛋白酶 K 消

化、水化高压、单抗孵育和 ABC 试剂盒显色等步骤分析，建立了一套完整的绵羊痒病

小鼠模型病理学检测方法。

人工脑内感染小鼠痒病 RML、22L 毒株，分别在感染后 90d、110d、120d、150d、

160d 取脑、脾组织，用酶标法进行免疫组织化学检测。结果：人工脑内感染 RML 毒株

感染后 90d、110d、120d、150d、160d 小鼠脾脏，均存在朊毒体（PrPSc）；感染后 90d、

110d、120d、150d、160d 脑组织均未检测到 PrPSc。人工脑内感染 22L 毒株感染后的 90d、

110d、120d、150d、160d 小鼠脾脏均存在 PrPSc，感染后 90d、110d、120d、150d、160d

脑组织均存在 PrPSc。随着感染后天数的增加，朊毒体逐渐增多，且朊毒体呈逐渐增大

趋势。说明 RML、22L 毒株的毒力、侵害部位、体内蓄积时间有着明显的不同。

人工脑内感染小鼠痒病 RML、22L 毒株，待其发病后，取脑、脊髓、脾、肠系膜

淋巴结、小肠、大肠、心、肝、肺、肾、肌肉、膀胱等组织按常规方法制备组织切片，

脱蜡后进行 HE 和免疫组织化学（IHC）染色并观察。结果：在感染 RML、22L 毒株发

病小鼠脑、脊髓有空泡变化且空泡呈规则的圆形或椭圆形，周边整齐。心、肝、脾、肺、

肾、肌肉、胃、膀胱等组织器官未见明显病理变化。感染 RML 毒株发病小鼠脑、脾、

肠系膜淋巴结、小肠有阳性红色染色颗粒说明有 PrPSc 存在，脊髓、心、肝、肺、肾、

回肠末端、膀胱、肌肉等组织器官未有 PrPSc 存在。感染 22L 毒株发病小鼠脑、脊髓、

大肠、脾、肠系膜淋巴结见有阳性红色染色颗粒说明有 PrPSc 存在，心、肝、肺、肾、

小肠、膀胱、肌肉等组织器官未见到阳性红色颗粒，未有 PrPSc 存在。

关键词

绵羊痒病；RML 毒株；22L 毒株；免疫组织化学；HE

目 录

摘要……………..………….Ⅰ

ABSTRACT……...…….….Ⅱ

英文缩写词表………….…..Ⅲ

前 言…….…………….….....1

1 综述前言....1

2 传染性海绵状脑病研究简史........1

3. 人和动物传染性海绵状脑病.......2

4 传染性海绵状脑病的诊断方法....9

5. 朊蛋白和朊毒体的分子特征.....12

6. 朊蛋白免疫学诊断技术研究.....20

研究内容…………………… ………………….…… 22

试验一 绵羊痒病小鼠模型病理学检测方法的建立........22

1.1 材料和方法..............22

1.1.1 材料.....22

1.1.2 实验方法...............23

1.2 结果.......25

1.2.1 单抗鉴定结果……….25

1.2.2 检测流程的确定…….25

1.2.3 病理组织学染色…….26

1.2.4 免疫组织化学染色结果……………………….27

1.3 讨论........28

1.4 小结…………………….29

试验二 人工感染 RML、22L 绵羊痒病毒株小鼠器官组织 IHC 动态检测 ....30

2.1 材料和方法.............30

2.1.1 材料....30

2.1.2 方法………………….30

2.2 结果.......31

2.2.1 感染 RML 毒株小鼠的脑免疫组织化学观察 ........31

2.2.2 感染 RML 毒株小鼠脾免疫组织化学观察 ............32

2.2.3 感染 22L 毒株小鼠脑免疫组织化学观察 ...............34

2.2.4 感染 22L 毒株小鼠脾免疫组织化学观察 ................35

2.3 讨论........37

2.4 小结………………….…37.

试验三 人工感染 RML、22L 绵羊痒病毒株小鼠的病理组织学观察..............38

3.1 材料和方法.............38

3.1.1 材料....38

3.1.2 实验方法..............38

3.1.3 H-E 染色基本程序及观察.....39

3.1.4 免疫组织化学染色程序及观察...............39

3.2 结果........39

3.2.1 人工感染 TSE 小鼠病理组织学观察 ....39

3.2.2 人工感染 TSE 小鼠免疫组织化学观察 .45

3.3 讨论........54

3.3.1 感染 TSE 小鼠各器官病理组织学观察 54

3.3.2 感染 TSE 小鼠各器官免疫组织化学观察 ..............54

3.4 小结…………………….55

结论………………………...56

参考文献…………………...57

致谢 ............ 61

附录 ............ 62

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