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适用专业：预防兽医学
适用年级：大学
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资料简介：
硕士论文-鸡传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒质粒的构建，共67页，37328字
中 文 摘 要
1．将鸡痘病毒疫苗毒接种鸡胚成纤维细胞，收获病变细胞，提取鸡痘病毒 DNA。根
据 GeneBank 中已发表的鸡痘病毒基因序列，设计两对引物用于扩增大小分别为 1600bp
和 1800bp 的 FPV1 和 FPV2 目的基因片段。于 9~11 日龄 SPF 鸡胚上增殖纯化鸡传染性
喉气管炎病毒疫苗毒，根据 GeneBank 中已发表的 ILTV 基因序列设计一对能扩增 2700bp
的 gB 目的基因片段。设计一对引物，从质粒 EGFP 中扩增大小约为 750bp 的 GFP 目的
基因片段。将获得的四个目的基因分别克隆到 pMD19-T simple vector 上，筛选阳性克隆
进行序列分析。结果表明：获得的目的基因片断序列分别与标准株序列相符，可以用于
下一步构建鸡传染性喉气管炎病毒 gB 基因重组鸡痘病毒质粒的试验。
2．将测序完的 FPV1 和 FPV2 分别克隆到 pUC19 和 pSK 质粒中，并命名为 pFP1
和 pFP2 。将测序后的 gB 基因酶切后克隆到质粒 pFP1 中获得重组质粒 pFP1-gB；将测
序后的 GFP 基因酶切后克隆到质粒 pFP2 中，得到重组质粒 pFP2-GFP。双酶切 pFP1-gB
得到 FP1-gB 片段，并克隆到质粒 pFP2-GFP 中，得到重组质粒 pFP1gB-FP2GPF。酶切质
粒 pE/L-7.5，获得背向连接的 2 个鸡痘病毒启动子片段-PE/L-7.5，并将该片段克隆到重
组质粒 pFP1gB-FP2GFP 获得重组质粒 pgB-GFP，该质粒即为鸡痘病毒的转移质粒。在
质粒 pgB-GFP 中，2 个背向连接的启动子被克隆到 gB 和 GFP 基因之间，分别启动 gB
和 GFP 基因的表达。经过鉴定证明已获得鸡传染性喉气管炎病毒 gB 基因重组鸡痘病毒
质粒 pgB-GFP。该质粒为下一步获得表达鸡传染性喉气管炎病毒 gB 基因的重组鸡痘病
毒奠定基础。
关键词
鸡传染性喉气管炎病毒; gB 基因; 重组鸡痘病毒
目录
中 文 摘 要.... I
Abstract ...........II
符号说明....... III
前 言............... 1
第一部分 文献综述..... 3
一、病原学............. 3
二、流行病学及致病机理... 10
三、病理变化....... 13
四、防制............... 15
五. ILT 的根除...... 19
第二部分 试验内容..... 20
试验一
目的基因的克隆及序列分析..... 20
1 材料... 20
2 方法... 21
3 结果与分析....... 27
4 讨论... 29
试验二 ILTV gB 基因重组鸡痘病毒质粒的构建...... 31
1 材料... 31
2 方法... 32
3 结果与分析....... 40
4 讨论.... 46
全文总结....... 51
参考文献....... 52
致 谢............. 56
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- 硕士论文-鸡传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒质粒的构建
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