[硕士论文] 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及其分子流行病学分析 [复制链接]

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硕士论文-高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及其分子流行病学分析，共65页，30630字

摘 要

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是目前危害山东省养猪业最严重的传染病之一。为了弄

清PRRS在山东省的流行情况，课题组近几年陆续开展了山东省猪场PRRS病原学和血清学

调查.结果发现PRRS近两年（2006～2007年）的抗原检出率达57.9％，与2001～2003年

期间的检出率(44.3%)和2004～2005年期间的检出率(51.2%)相比，呈现一定的上升趋

势，且地区分布不均，对2006～2007年检测的部分阳性样品进行变异株和传统株检测,

发现山东省猪场近两年同时存在高致病性PRRSV变异株和传统株感染，而猪场PRRSV抗体

阳性率高达76%，是否存在PRRSV感染还要依据各个猪场的免疫程序来定。

2006 年底及 2007 年初，山东部分地区出现猪高死亡率的“无名高热综合征”。从

其死亡病例中分离到高致病性 PRRSV 变异株，并进行了系统鉴定，暂命名为 PRRSV

ShanDong-3 株，SD-ZQ 株和 SD-JN 株。为了验证所分离株的致病性，对 SD-JN 株进行了

病毒 TCID50的测定和本体动物回归试验，结果复制出临床“无名高热综合征”的发病特

征。因此,可以初步认定这种变异株是山东省猪场“无名高热综合征”流行的主要病因

之一。

应用 RT－PCR 方法从三株高致病性 PRRSV ShanDong-3、SD-ZQ、SD-JN 株中扩增出

ORF5，ORF6 ，ORF7 和部分 Nsp2 基因，并进行克隆、测序。遗传演化关系分析表明：

三株高致病性 PRRSV 分离株之间 ORF5 基因、ORF6 基因、ORF7 基因核苷酸序列高度同源，

分别为 97.8～100％、99.4～99.8％、99.2～99.7％；ORF5 与 VR-2332 株同源性相差较

大，为 88.9～89.2%，ORF6、ORF7 与 VR-2332 株同源性较高，分别为 94.7～94.9％、

93.5～94.1％；与变异株 JXA1 同源性分别达 98～99.3%、99.6～99.8%、99.5～100%；

与传统疫苗株 MLVRespPRRS Repro 同源性为 88.6～88.9% 、94.9～95.1％、93.5～94.1

％；与 LV 株仅为 63.7%、69.4%、64.7～65.7%，说明三株高致病性 PRRSV 仍属北美洲

型。

在影响病毒毒力的 ORF5 基因编码的 13 位和 151 位氨基酸均为强毒氨基酸(R)，结

合动物回归实验可判定三株病毒均为强毒株。三株病毒均在 Nsp2 基因出现两处氨基酸

的缺失，其中一处连续缺失 29 个氨基酸，另一处缺失 1 个氨基酸，与 2006 年夏天中国

暴发流行的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的特征一致。

关键词：高致病性 PRRSV;流行病学；调查；分离；鉴定；动物回归；序列分析

目录

中文摘要 …………………1

英文摘要…………… 2

英文缩略词…………………4

前言…………………1

猪繁殖与呼吸综合征病毒综述…………………3

试验一 山东省猪场 PRRSV 病原学和血清学调查…………………… 12

1.材料与方法………12

2.结果与分析 …… 14

3.讨论…………… 17

试验二

1.高致病性 PRRSV 的分离鉴定 …… 18

2.结果与分析……… 21

3.讨论……………… 26

试验三

高致病性 PRRSV 主要基因的克隆与序列分析……………28

1.材料与方法……… 28

2.结果与分析……… 32

3.讨论……………… 42

结论…………………… 44

参考文献……………… 45

附录…………………… 49

攻读硕士期间发表的论文……………………… 53

致谢…………………… 54

导师组意见…………… 55

学位论文独创性声明… 56

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