[硕士论文] 耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因地高辛标记核酸探针的制备及应用 [复制链接]

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硕士论文-耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因地高辛标记核酸探针的制备及应用，共53页，28500字

摘 要

耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）是引起医院感染的一种主要病原菌，严重危害人类健

康。尽管医学研究领域已对 MRS 进行了大量的研究，但目前 MRS 尚未引起兽医工作者

的重视。mecA 基因作为 MRS 的分子标志，在葡萄球菌属中广泛分布，目前在葡萄球菌

属以外的细菌中尚未检出，因此 CLSI 将检测 mecA 基因作为鉴定 MRS 的金标准。

为了解 MRS 在畜禽间的存在情况，本试验从畜禽体表及体内分离葡萄球菌，筛选

出 MRS，对其进行药敏试验，以了解其耐药性，为兽医临床合理用药提供参考。同时，

建立了针对 mecA 基因片段的 PCR 和核酸探针方法，并分别对葡萄球菌分离株进行检测，

以明确耐甲氧西林葡萄球菌在畜禽中的携带情况。

本研究从鸡、猪、兔、犬的体表及体内分离出 75 株葡萄球菌，通过生化编码鉴定

系统鉴定，主要是金黄色葡萄球菌、木糖葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、猪

葡萄球菌。通过头孢西丁纸片扩散法筛选出 40 株 MRS，占葡萄球菌分离株的 53.3%。

药敏试验的结果显示，耐甲氧西林葡萄球菌菌株对万古霉素、头孢唑啉、阿米卡星等少

数几种药物较敏感，有 55.0%以上的 MRS 对青霉素 G、氨苄青霉素、四环素、红霉素、

克林霉素、氯霉素、诺氟沙星、环丙沙星耐药，未发现万古霉素耐药菌株。

建立了针对 mecA 基因片段的 PCR 检测耐甲氧西林葡萄球菌的方法。用 PCR 方法

对 75 株葡萄球菌分离株进行检测，检出 42 株 MRS，占 56.0%，该方法与头孢西丁纸片

扩散法的总符合率为 97.3%。

建立了针对 mecA 基因片段的地高辛标记核酸探针方法。用该方法对 75 株葡萄球菌

分离株进行检测，检出 47 株 MRS，占 62.7%，该方法与 PCR 方法的总符合率为 93.3%，

与头孢西丁纸片扩散法的总符合率为 90.7%。

通过本研究证实，在畜禽的体表及体内能够分离到 MRS，且有较高的分离率（经

不同的方法检测为 53.3%~62.7%），动物源性 MRS 耐药严重呈现多重耐药，应该引起兽

医工作者的足够重视。本研究建立了用核酸探针检测 MRS 的方法，可以对大量样本进

行检测，为防止 MRS 在畜禽间流行奠定基础，从公共卫生的角度讲，也为防止 MRS

通过接触或食源等途径从动物传播给人类提供依据。

关键词：耐甲氧西林葡萄球菌；畜禽；mecA 基因；耐药性；核酸探针；PCR

目录

摘要……………Ⅰ

英文摘要………Ⅱ

缩略语表……Ⅳ

第一章 文献综述1

第二章 试验研究………………9

试验一 动物源性耐甲氧西林葡萄球菌的分离、鉴定及耐药性分析9

1 材料与方法 …9

2 结果与分析…11

3 讨论…………14

4 小结…………15

试验二 耐甲氧西林葡萄球菌 mecA 的 PCR 检测16

1 材料与方法…16

2 结果与分析…21

3 讨论…………28

4 小结…………28

试验三 耐甲氧西林葡萄球菌 mecA的核酸探针检测………………29

1 材料与方法…29

2 结果与分析…33

3 讨论…………35

4 小结…………36

结论……………37

参考文献………38

致谢……………43

导师组意见……44

学位论文独创性声明……………45

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