[硕士论文] 山东省仔猪腹泻主要病原调查研究 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-山东省仔猪腹泻主要病原调查研究，共63页，35844字

摘要

试验主要从山东省 5 个地区的 50 例疑似猪源性致病性大肠杆菌病例中分离出的 48

株猪源性大肠杆菌进行 O 血清型鉴定、耐药性及致病性研究。O 血清型鉴定试验结果表

明：48 株猪源性大肠杆菌分属 14 种血清型，其中，流行的主要血清型为 O139(18.75%)、

O119(16.67%)、O89(12.50%)和 O20(12.50%)，共 29 株，占定型菌株的 60.42%。耐药性

试验结果表明：48 株猪源性大肠杆菌对青霉素类抗生素、四环素类抗生素和氯霉素类抗

生素耐药严重，以四环素、卡那霉素、氯霉素、阿莫西林和链霉素最为严重，对头孢菌

素类和氨基糖苷类抗生素敏感，以头孢唑啉、丁胺卡那霉素和菌必治最为敏感，各分离

菌株均有不同程度的多重耐药性。致病性试验结果表明：48 株猪源性大肠杆菌对小白鼠

具有致病性。

根据 Genbank 中猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的基因组

序列，结合两种病毒基因组结构特点，在对两种病毒基因序列进行同源性比较的基础上，

选择二者的 S 蛋白基因为引物设计区，根据 PCR 引物设计原则，应用 Primer5.0 软件设

计出 TGEV 和 PEDV 各两条引物。其中，TGEV 的引物可扩增出 212bp 的特异片段，PEDV

的引物可扩增出 241bp 的特异片段。试验归纳出 TGEV 和 PEDV 单项 RT-PCR 体系的最

优引物浓度和退火温度为：引物浓度，TGEV0.8-1.0μmol/L,PEDV1.0μmol/L，退火温度，

TCEV54℃，PEDV58℃。对山东省不同地区的 24 例疑似病毒性腹泻病例进行 RT-PCR

技术诊断，结果 TGEV 阳性感染率为 54.17%，PEDV 阳性感染率为 75.00%，TGEV 和

PEDV 混合感染率为 29.17%，基因测序结果表明同源率达 99%以上。

关键词：大肠杆菌；O 血清型；药敏试验；猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)；猪流行

性腹泻病毒(PEDV)

目录

摘要 .......I

ABSTRACT ....II

英文缩略符号 .............III

文献综述 .....1

1 前言 .......1

2 大肠杆菌分离鉴定、血清型及耐药性分析的研究进展 ........2

2.1 大肠杆菌的分离鉴定......2

2.2 大肠杆菌耐药性分析......4

3 TGEV和PEDV生物学特性及诊断方法研究进展..6

3.1 TGEV生物学特性 .........6

3.2 TGE诊断方法 ............9

3.3 PEDV生物学特性 ........11

3.4 PED诊断方法 ...........13

试验一

大肠杆菌的分离鉴定及研究........15

1 材料与方法 15

1.1 材料 ....15

1.2 方法 ....15

2 结果与分析 19

2.1 大肠杆菌分离鉴定 ......19

2.2 血清型鉴定结果 ........21

2.3 药敏试验 22

2.4 致病性试验结果 ........30

3.讨论 ......30

3.1 猪源性大肠杆菌发病率分析.............30

3.2 猪源性大肠杆菌血清型分析.............31

3.3 猪源性大肠杆菌耐药性分析.............31

3.4 致病性试验分析 ........32

3.5 控制大肠杆菌耐药性的策略.............32

试验二

病毒分离鉴定.....33

1 材料与方法 33

1.1 材料 ....33

1.2 方法 ....34

2 结果与分析 39

2.1 参考毒株培养结果 ......39

2.2 TGEV和PEDV的S蛋白基因引物设计结果....39

2.3 参考毒株毒价检测结果...39

2.4 PCR鉴定结果 ...........40

2.5 测序结果 41

3 讨论 ......43

3.1 关于TGEV和PEDV的检测 ..43

3.2 关于TGEV和PEDV的引物设计.............43

3.3 关于RNA酶的控制问题....44

3.4 关于TGEV和PEDV的预防问题.............44

结论 ......45

参考文献 ....46

致谢 ......53

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