[硕士论文] 采后水分和营养胁迫与青花菜未成熟衰老关系的研究 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-采后水分和营养胁迫与青花菜未成熟衰老关系的研究，共61页，30815字

摘 要

研究了采后水分和营养胁迫对青花菜（Brassica oleracea,var.italica.）贮藏过

程中乙烯释放、ACC 和 MACC 含量、ACC 氧化酶活性以及乙烯生物合成过程中两个关键酶

基因--ACC 合成酶（BO-ACS1 和 BO-ACS2）和 ACC 氧化酶（BO-ACO1,BO-ACO2 和 BO-ACO3）

基因转录水平的影响。并对采后不同处理的青花菜在贮藏期间叶绿素、抗坏血酸、可溶

性蛋白和可溶性糖含量及总抗氧化活性变化等进行了分析测定，结果表明：采后水分和

营养胁迫加速了青花菜叶绿素、抗坏血酸、可溶性蛋白的降解和可溶性糖的消耗。水分

胁迫尤其是水分过多促进了 ACC 积累，提高了 ACO 活性；促进了花蕾乙烯释放，从而加

速了花蕾衰老；但是对 MACC 含量测定发现，水分缺乏时体内 MACC 水平增加，水分过多

时 MACC 积累相对较低。营养胁迫降低 ACC 的合成，因此同样条件下营养胁迫处理其乙

烯释放速率低。

ACS 和 ACO 基因转录水平的实时荧光 PCR 分析表明，BO-ACS1 基因主要在采后青花

菜茎中表达，而且转录水平远高于 BO-ACS2。ACC 氧化酶中 BO-ACO1 主要在茎中表达，

BO-ACO2 主要在花蕾中表达，BO-ACO3 在花蕾和茎中均有表达。青花菜采后水分和营养

缺乏主要影响 BO-ACO3 的转录水平，因此贮藏期间 ACC 氧化酶活性的变化可能主要与

BO-ACO3 基因表达有关。水分缺乏和营养胁迫均降低了花蕾 BO-ACS1 转录水平，但是水

分缺乏促进了 BO-ACO3 的转录，从而导致二者在乙烯释放方面的差异。因此水分胁迫可

能通过影响 ACO 基因的转录而影响 ACO 酶活性，进而影响了乙烯的生物合成。

关键词：青花菜（Brassica oleracea,var.italica）；水分胁迫；营养胁迫；基因

表达；衰老；乙烯；

目 录

摘 要I

Abstract......... II

英 文 缩 写 词...........III

前 言............... 1

文 献 综 述... 2

1 青花菜未成熟衰老研究进展...... 2

1.1 形态和生理生化变化............... 2

1.2 未成熟衰老机理和分子生物学的研究... 4

1.2.1 衰老机理 4

1.2.1.1 乙烯的生物合成途径......... 4

1.2.1.2 调控乙烯合成的关键酶..... 5

1.2.1.3 乙烯受体的研究. 5

1.2.1.4 乙烯在衰老中的作用......... 6

1.2.2 分子生物学的研究 6

2 水分胁迫与植物衰老.. 7

2.1 植物水分胁迫信号识别与转导............... 7

2.2 水分胁迫对植物的伤害........... 8

3 营养胁迫与植物衰老.. 8

3.1 植物体内糖信号及转导机制... 9

3.2 影响糖信号的主要因素........... 9

3.2.1 植物激素 9

3.2.2 碳水化合物及其代谢相关酶 9

3.2.3 营养和环境胁迫.. 10

3.3 采后糖胁迫与青花菜衰老..... 10

材料与方法... 11

1 植物材料.... 11

2 试验处理.... 11

3 取样............ 11

4 测定指标和方法........ 12

4.1 乙烯释放量测定..... 12

4.2 外观颜色评分......... 12

4.3 呼吸强度测定......... 12

4.4 叶绿素测定............. 12

4.5 抗坏血酸测定......... 13

4.6 可溶性蛋白质含量测定......... 13

4.7 SOD POD CAT 活性和丙二醛含量的测定 .......... 13

4.8 总抗氧化性的测定. 13

4.9 乙烯生物合成关键酶及其代谢中间产物的测定分析 ......... 13

4.9.1 ACC 和 MACC 含量测定 ... 14

4.9.2 ACC 氧化酶活性测定......... 14

4.10 ACC 合成酶和 ACC 氧化酶基因表达的测定分析............ 14

4.10.1 RNA 的提取 ...... 14

4.10.2 反转录 16

4.10.3 引物、探针的设计和合成 16

4.10.4 实时荧光定量 PCR ........... 17

结果与分析... 19

1 采后水分和营养胁迫对青花菜黄化和叶绿素降解的影响 .... 19

2 采后水分和营养胁迫对青花菜抗坏血酸（Vc）降解的影响 20

3 采后水分和营养胁迫对青花菜呼吸强度的影响 .... 21

4 采后水分和营养胁迫对青花菜可溶性蛋白含量的影响 ........ 22

5 采后水分和营养胁迫对青花菜可溶性糖含量的变化 ............ 22

6 采后水分和营养胁迫对青花菜 MDA 含量和抗氧化性酶活性的影响. 23

6.1 采后水分和营养胁迫对青花菜 MDA 含量的影响 ............. 23

6.2 采后水分和营养胁迫对青花菜抗氧化酶活性的影响 ......... 25

7 采后水分和营养胁迫对青花菜乙烯释放速率的影响 ............ 26

8 采后水分和营养胁迫对青花菜 ACC 含量的影响.. 28

9 采后水分和营养胁迫对青花菜 MACC 含量的影响 .............. 29

10 采后水分和营养胁迫对青花菜 ACO 活性及其基因表达的影响........ 30

10.1 对青花菜 ACO 活性的影响 30

10.2 ACS 基因转录水平的实时荧光 PCR 分析......... 31

10.3 ACO 基因转录水平的实时荧光 PCR 分析 ........ 33

讨论........... 36

1 采后水分和营养胁迫对乙烯生物合成影响及其作用机理 .... 36

2 采后水分和营养胁迫对青花菜衰老的影响 ............ 36

3 对膜脂过氧化和抗氧化性酶活性的影响 37

小 结............. 39

参考文献....... 40

致 谢............. 47

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