[硕士论文] CpG-ODN对猪免疫增强作用的研究 [复制链接]

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硕士论文-CpG-ODN对猪免疫增强作用的研究，共59页，27397字

摘 要

细菌 DNA 具有广谱的免疫刺激作用，有实验证明人工合成的 CpG-ODN 可以模拟细菌

DNA 诱发机体产生强烈的 Th1 型免疫应答，CpG-ODN 作为一种新型的免疫佐剂已成为分

子免疫学研究的热点之一。本研究将人工合成的三种 CpG-ODN 分别与猪瘟弱毒疫苗联合

免疫仔猪，结果表明三种 CpG-ODN 均具有免疫增强作用，筛选出免疫增强作用最好的一

种 CpG-ODN。对该种序列进行体外克隆扩增，并将该重组质粒分不同的剂量与猪瘟弱毒

疫苗联合免疫仔猪，以确定重组质粒的免疫剂量与免疫增强作用间的关系。

1.人工合成三种以胞嘧啶鸟嘌呤脱氧核苷酸为核心的 CpG-ODN，并进行硫代修饰。

三种硫代修饰的 CpG-ODN 序列分别为 ATCGATATCGAT

GACGTTGACGTT

AACGTTAACGTT。

2.将三种 CpG-ODN 与猪瘟弱毒疫苗联合免疫仔猪，试验设对照组、疫苗组、疫苗与

CpG-ODN 合用组，通过对体液免疫指标（抗体效价）以及细胞免疫指标（MTT 法测淋巴

细胞增殖能力、酯酶染色法确定 T 淋巴细胞百分率、IL-2 定量检测法确定 IL-2 的分泌

量）的统计分析，综合评价三种不同 CpG-ODN 的免疫增强作用。猪体内试验表明三种

CpG-ODN 序列均具有免疫增强作用，并筛选出在猪体内试验中免疫增强作用最好的一种

序列为 ATCGATATCGAT。

3.合成 ATCGATATCGAT 及其互补链，退火使两条链配对形成 CpG-ODN 单体与 pMD18-T

载体连接，转化大肠杆菌，通过蓝白斑初步筛选阳性质粒，通过酶切鉴定重组质粒，并

测序。结果表明 CpG-ODN 成功插入到 pMD18-T 载体上。

4.大提质粒，并将该质粒分不同剂量（100μg/只、300μg/只、600μg/只、900μ

g/只、1200μg/只）与猪瘟弱毒疫苗联合免疫仔猪。试验设疫苗组、空载体与疫苗合用

组，重组质粒与疫苗合用组。结果表明， 600μg/只剂量的重组质粒与疫苗合用组的免

疫增强作用最强。

关 键 词：CpG-ODN；免疫佐剂；免疫应答；猪瘟弱毒疫苗

目录

摘要………Ⅰ

英文摘要……Ⅱ

英文缩写词表……………………Ⅲ

前言…………1

文献综述

1 CpG-ODN 的特征结构及免疫学活性 ……………………3

2 CpG-ODN 的免疫激活机理 ………4

3 CpG-ODN 的应用 …………………5

试验内容

1 CpG-ODN 免疫增强序列的筛选

1.1 材料与方法 ……………………8

1.2 结果与分析 ……………………9

1.3 讨论 …15

1.4 小结……16

2 CpG-ODN 的体外克隆扩增

2.1 材料与方法…………………17

2.2 结果与分析……………………20

2.3 小结 …21

3 重组质粒免疫剂量的筛选

3.1 材料与方法…………………22

3.2 结果与分析…………………23

3.3 讨论……29

3.4 小结……30

结论………32

参考文献……33

附录………36

致谢…………47

导师组意见 48

学位论文独创性声明 …………… 49

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