[硕士论文] 水貂犬瘟热病毒与抗体检测方法的研究 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-水貂犬瘟热病毒与抗体检测方法的研究，共52页，28810字

摘 要

1 通过对河北、山东等地疑似犬瘟热的水貂临床症状和病变进行研究，探讨水貂犬瘟热

的临床症状和病变新特点，并进行流行病学调查。研究发现近几年患病水貂出现临床症

状病变新的变化，足垫的角质化、皮肤病变现象逐渐减少，后肢瘫痪症状增多。病变与

其他疫病症状相类似，缺乏特征性病变。发病急，死亡率高。一年四季都有发生。

2 取一发病水貂的肝、脾、脑等组织，常规处理后接种 MDCK 细胞分离病毒，采用 RT-PCR

检测病毒。结果显示，应用 MDCK 细胞分离病毒，传 3 代后出现明显细胞病变。利用

特异性引物，对病毒分离的细胞培养物和疫苗株分别提取总 RNA 进行 RT-PCR 扩增，

得到长度为 294bp 的特异性片段，证明了 CDV 的感染。

3 本试验筛选出 PBST 为样品稀释液，建立胶体金试剂盒。对各项指标进行检测，结果

表明：敏感性试验中，阳性病料经倍比稀释处理，经试纸条检测最高稀释倍数为 23；阻

断试验中，貂抗 CDV 高免血清能特异地阻断阳性反应；交叉试验显示犬细小病毒、犬

传染性肝炎、犬冠状病毒均为阴性；不同批次的试纸条各检测 5 份阳性病料，均呈现阳

性反应，表明重复性高；将测试条低温干燥密封保存，每隔一周检测同一份阳性样品，

在半年内其检测结果不变；应用试验结果表明肺和脑为检测首选的组织样品；临床症状

及病理变化诊断、RT-PCR 和胶体金快速诊断三种抗原检测方法的比较表明胶体金快速

诊断适用于快速临诊诊断。

4 本试验提纯水貂免疫球蛋白，制备 HRP-兔抗水貂免疫球蛋白抗体，为间接 ELISA 提

供二抗，琼扩效价为 1：16；同时利用本室已构建的 pET-32a-F 转化宿主菌 BL21，对重

组 F 蛋白其进行提纯，制备间接 ELISA 所需的抗原，为下一步建立水貂抗 CDV 抗体间

接 ELISA 奠定基础。

关键词： 犬瘟热病毒； 临床症状与病变； 流行病学； 病毒分离； RT-PCR；

胶体金诊断； 兔抗貂 IgG； 重组 F 蛋白

目 录

摘 要 …

英文摘要 ……………………

符号说明 ……………………

前言 …

文献综述 ……………………

1 CDV 的生物学特性 ………

2 CDV 基因组结构和功能 …

3 流行病学、临床症状及病理变化 ………………

4 疫苗

5 犬瘟热诊断技术 …………

试验内容 ……………………

1 水貂犬瘟热临床症状及病变新特点与流行病学调查 …………………

1.1 材料与方法 ……………

1.1.1 材料……………………

1.1.2 方法……………………

1.2 结果与分析………………

1.2.1 临床症状与病变检查…

1.2.2 流行病学调查…………

1.3 讨论

2 水貂犬瘟热病毒的分离及 RT-PCR 鉴定…………

2.1 材料与方法………………

2.1.1 材料 ……………………

2.1.2 主要试剂 ………………

2.1.3 溶液配制 ………………

2.1.4 主要仪器 ………………

2.1.5 方法 ……………………

2.2 结果与分析………………

2.2.1 病毒的分离结果………

2.2.2 RT-PCR 检测结果………

2.3 讨论

3 水貂犬瘟热病毒的胶体金快速诊断及试剂盒的研制 …………………

3.1 材料与方法 ……………

3.1.1 材料……………………

3.1.2 方法……………………

3.2 结果与分析………………

3.2.1 胶体金试纸条的制备与组装…………………

3.2.2 测试方法与评判标准…

3.2.3 胶体金试纸条效果检测

3.2.4 应用……………………

3.3 讨论

4 HRP-兔抗水貂 IgG 的制备和重组 F 蛋白的提纯… 25

4.1 材料与方法………………

4.1.1 材料……………………

4.1.2 主要试剂………………

4.1.3 溶液配制………………

4.1.4 主要仪器………………

4.1.5 方法……………………

4.2 结果与分析………………

4.2.1 HRP-兔抗水貂 IgG 制备

4.2.2 CDV 重组 F 蛋白提纯

4.3 讨论

结论 …

参考文献 ……………………

致谢 …

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