[硕士论文] 牛传染性鼻气管炎病毒gD基因的克隆表达及ELISA诊断方法初步建立 [复制链接]

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硕士论文-牛传染性鼻气管炎病毒gD基因的克隆表达及ELISA诊断方法初步建立，共53页，29356字

摘要

1.根据已发表的 IBRV 的 gD 基因序列设计一对含有 BamHⅠ，HindⅢ酶切位点引物，

通过 PCR 方法扩增 766bp 的目的条带 gD，将 gD 基因克隆到原核表达载体 pET32a，得到

重组表达载体 pET32-gD，将重组表达载体转化到 BL21（DE3）中，用 IPTG 诱导表达后，

分子量约为 53 KDa 的带有 6 个 His 标签的融合蛋白得到高效表达。表达蛋白经 SDS-PAGE

检测，亲和层析法纯化，最后通过免疫印迹得到鉴定。

2.重组蛋白 His-tgD 过柱纯化后，作为抗原包被聚苯乙烯微量反应板，初步建立检

测 IBRV 抗体的间接 ELISA 诊断方法。实验结果表明：酶标板的变异系数为 7.3％，抗原

的最适包被浓度为 37.4μg/ml，血清最适稀释度为 1：80；最适封闭液为 1%BSA，封闭

时间为 37℃ 1h，最佳血清及二抗反应时间确定为 37℃ 1h 和 0.5h；底物显色液的最佳

反应时间为 15min；统计学分析后确定阴阳性的临界值为 0.5。用建立的 ELISA 方法检

测其它四种牛病的阳性血清均为阴性。证明该方法与其它四种牛病阳性血清没有交叉反

应性。该方法具有良好的批内及批间重复性，该方法与牛传染性鼻气管炎 ELISA 试剂盒

（IDEXX）检测结果的符合率达到 91.3%。IBRV 间接 ELISA 诊断方法的建立为 IBR 抗体

监测和流行病学调查提供了一种快速简便的血清学方法。

关键词： 牛传染性鼻气管炎病毒；融合蛋白；gD 基因；表达；ELISA

目录

中文摘要..

英文摘要..

符号说明..

前言……..

1.IBRV 分子生物学特征….

2. IBRV 基本生物学特性…

3. 流行病学………………

4. 疫苗…

5. 疱疹病毒活载体………

6. 牛传染性鼻气管炎病毒诊断方法研究进展………………

实验研究..

1 牛传染性鼻气管炎病毒 gD 基因的克隆表达……………….. 14

1.1 材料和方法…………...

1.2 结果...

1.3 讨论...

1.4 小结...

2 牛传染性鼻气管炎病毒抗体 ELISA 检测方法的建立……… 30

2.1 材料...

2.2 方法...

2.3 结果与分析…………...

2.4 讨论...

2.5 小结...

结论.…….

参考文献..

致谢.…….

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• 硕士论文-牛传染性鼻气管炎病毒gD基因的克隆表达及ELISA诊断方法初步建立
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