[硕士论文] 猪传染性胃肠炎病毒分离鉴定及油乳剂灭活苗的研究 [复制链接]

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硕士论文-猪传染性胃肠炎病毒分离鉴定及油乳剂灭活苗的研究，共59页，28594字

摘 要

采用猪睾丸细胞（ST 细胞）静置培养和胰酶处理样本的方法，从猪传染性胃肠炎疑

似病例粪便中分离到一株 TGEV。该分离株电镜观察呈圆形或椭圆形，大小均一，直径为

100-120nm。病毒带有囊膜，厚度约为 10nm，表面附有纤突，长度约为 18nm 左右。对该

病毒分离株进行 RT-PCR 扩增，序列分析证明分离的病毒为猪传染性胃肠炎病毒。该分

离株对氯仿敏感，不耐热，常温下 pH3.0 对毒力影响不大。

对其培养条件进行优化结果表明：用含 10%犊牛血清 RPMI1640 营养液、pH7.4 条件

下培养 ST 细胞，能显著提高细胞生长速度和形成单层的质量并且有利于接毒后对 CPE

的判定；病毒在 ST 和 PK-15 细胞上均能产生 CPE，但病毒在 ST 细胞上 CPE 出现早，且

病变明显，毒价为 106.33TCID50/0.1ml，高于 PK-15 细胞毒毒价；病毒的最佳收毒时间为

48h。维持液中添加血清（2%）或一定量胰酶对 TGEV 增殖效果影响不大。在 37℃下用甲

醛灭活，至规定的时间，用焦亚硫酸钠终止其灭活，用细胞感染法检测灭活效果，结果

表明 TGEV 细胞培养液完全灭活的时间为 48h。

以 该 分 离 株 为 种 毒 接 种 猪 睾 丸 细 胞 (ST) ， 制 备 病 毒 抗 原 液 ， 毒 价 不 低 于

105TCID50/0.1ml。经甲醛溶液灭活后与油相佐剂乳化研制成油乳剂灭活疫苗 3 批。对该

制品的安全性、免疫性进行了测定。18g 左右小白鼠接种 0.3ml，初生仔猪和妊娠母猪

加倍剂量注射，均未出现不良反应，安全性良好。用该疫苗免疫 3 日龄初生仔猪，分别

于免疫后 7、14、21、28、35d 抽取仔猪血样用微量血清中和试验检测血清抗体。结果

在免疫后 14d 中和抗体滴度达到最高值，21d 时中和抗体滴度与 14d 时水平相当，然后

随日龄增大而下降。被动免疫试验中，免疫母猪所产仔猪通过哺乳获得了相当高的血清

抗体，在出生后第 14d 时接近母源抗体水平。免疫仔猪用分离毒株进行攻击，保护率为

100%，对照组全部发病。证明本试验研究的疫苗具有良好的免疫效果。

关键词： 猪传染性胃肠炎病毒；分离鉴定；油乳剂灭活苗

目 录

中文摘要 ………

英文摘要 ………

符号说明 ………

前言 ……………

文献综述…………

1 TGEV 形态学特征及培养特性 …

2 TGEV 理化学特性…………………

3 TGEV 抗原性

4 TGE 传染源、传播途径和宿主 …

5 TGE 流行特点

6 TGEV 的分离

7 TGEV 的电镜检测 ………………

8 TGE 免疫预防

研究内容…………

1 猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及其增殖条件的优化

1.1 材料与方法

1.2 结果与分析…

1.2.1 病毒分离…

1.2.2 病毒鉴定…

1.2.3 病毒的生物学特性……………

1.2.4 TGEV 的培养优化………………

1.2.5 生产用基础种子的鉴定………

1.3 讨论…………

2 猪传染性胃肠炎油乳剂灭活疫苗的研制及免疫效果观察 ………………

2.1 材料与方法…

2.2 结果与分析…

2.2.1 TGEV 灭活效果检查……………

2.2.2 疫苗质量检查…………………

2.2.3 疫苗安全性检查………………

2.2.4 疫苗免疫效果研究……………

2.3 讨论…………

结论………………

参考文献…………

附录………………

致谢………………

导师组意见………

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• 硕士论文-猪传染性胃肠炎病毒分离鉴定及油乳剂灭活苗的研究
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