[硕士论文] 五龙鹅Ig分子特性与免疫系统早期发育规律研究 [复制链接]

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硕士论文-五龙鹅Ig分子特性与免疫系统早期发育规律研究，共86页，42854字

摘 要

刘光磊

国内外关于鹅免疫方面的研究较少，鹅免疫球蛋白的类和亚类至今没有定性，免

疫系统发育的规律报道极少。本试验以优良的地方品种——五龙鹅为试验对象，主要

研究了五龙鹅 Ig 分子特性与免疫系统发育规律。获得如下研究结果：

1.用绵羊红细胞（SRBC）对五龙鹅免疫刺激，可得到富含鹅 IgY（GIgY）与鹅

IgM（GIgM）的血清，可进行 GIgY 和 GIgM 的粗提。选用 Sephadex G-200、Sephacryl

S-300、琼脂糖 CL-4B、DEAE-纤维素、DEAE-Sephacel A-50、CM-纤维素等层析介

质，摸索出了 GIg 分离纯化的条件，成功地分离到高纯度的 GIgY 和 GIgM 及相应的

H 链、L 链、Fab 段和 Fc 段，但未能分离到 GIgA 及 GIgM 的 J 链。

2.GIgY 分子量为 166kD，存在几个亚类，H 链约为 60kD，L 链约为 23.5kD；GIgM

的 H 链分子量分别为 51.72kD、48.30kD 和 44.09kD，L 链 20.30kD，GIgM 的分子量

约为 660～740kD；GIg、H 链的分子量均小于鸡、鸭；Fab 段分子量为 48.67kD，Fc

段为 68.62kD。

3.不同 GIg 间及 H 链、L 链间氨基酸含量存在差异，GIgY、H 链、L 链中酸性氨

基酸较多，而 GIgM、H 链、L 链中碱性氨基酸较多；GIgY 的 L 链中 Pro 的摩尔百分

数仅为 0.10％；GIgY 中 Cys 摩尔百分数为 2.25％，GIgM 为 3.26％。

4.GIgY 在 pH3.5～11.5 的范围内十分稳定，GIgM 在 pH4.0～10.5 的范围内稳定，

酸碱稳定性小于鹅 IgY，但 GIgM 在 pH3.5～4.5 时活性增加 5～8％。GIgY 热稳定性

较差，热变性反应级数为 1.2。

5.五龙鹅免疫系统发育研究表明：胸腺、法氏囊的发育，均随日龄变化先增大后

逐渐萎缩，疫苗免疫对其发育有显著影响（P<0.05）。疫苗免疫后可刺激免疫器官的

发育，同时也提前其萎缩的时间。免疫器官与其他系统的相对生长率及相关分析表明：

免疫器官的发育是相对独立的，不受其他器官系统的影响。

6.五龙鹅外周血淋巴细胞 ANAE+较低，随日龄的增加而增加。免疫组淋巴细胞

数量比未免疫组高，但 ANAE+％差异不显著（P>0.05）。

7.五龙鹅血浆中 IgY 含量约为胆汁的 10 倍，为小肠液的 100 倍；血浆 IgM 含量

约为胆汁的 3～6 倍，为小肠液的 15～20 倍。免疫组与未免疫组间、各日龄间存在差

异，且各种体液与日龄共同对 IgY 含量产生作用。血浆 IgY 消长规律与血浆总蛋白规

律一致，疫苗免疫可显著提高免疫后 10～60d 的 IgY 含量（P<0.05），胆汁与小肠液

IgY 初生时较低，后逐渐增加，疫苗免疫刺激可提高 IgY 含量，但效果不明显（P>0.05）。

五龙鹅血浆中 IgM 随日龄增加而逐渐降低，而胆汁与小肠液中的 IgM 则随日龄的增

加而升高。免疫刺激后胆汁中出现短暂的 IgM 含量上升的现象（P<0.05），血浆 IgM

含量显著提高（P<0.01），且 IgM 的高含量一直持续 30d 左右。

8.将五龙鹅血清 Ig 与人及家畜比较，发现禽类 IgY 含量均小于人及家畜，IgM 含

量类似。鸡、鸭、鹅、火鸡血清 IgY 含量以鹅最多，其顺序为“鹅>鸭>火鸡>鸡”，IgM

含量顺序为“鸡>鸭>火鸡>鹅”。

关键词：五龙鹅；IgY；IgM；分子特性；免疫系统；发育规律

目

录

前言…………

摘要…………

I

II

英文摘要…… III

论文正文

第一章 绪论

1.养鹅业的发展状况……

1.1 国内 外 养鹅业 的发 展

1.2 疫病防治 方 面面 临 的 问题 …………………

2.五龙鹅的研究进展…………

2.1 五龙鹅研究基础……

2.2 五龙鹅 免疫系统方面 的研究基础…………

3.禽类 Ig 的最新研究动态……

3.1 IgY……………………

3.2 IgM……………………

3.3 IgA……………………

3.4 Ig 基因结构及禽类 Ig 产生机制……………

3.5 Ig 分离纯化方法研究进展……………………

第二章

五龙鹅 Ig 分离提纯与分子特性研究…………… 10

1.引言… 10

2.试验设计…………………… 10

2.1 试验设计……………

2.2 技术路线……………

3 材料与方法………………… 14

3.1 试验材料……………

3.2 富含免疫球蛋白血清的制备………………

3.3 血清 GIg 的粗提……

3.4 血清 GIg 的分离纯化

3.5 PAGE 电泳鉴定纯度…

3.6 兔抗鹅 GIgY、 G IgM 的免疫血清…………

3.7 Western blotting 鉴定 GIg……………………

3.8 GIg 重链（H）及轻链（L）的制备和纯化……

3.9 GIg 生化特性研究……

4.结果与分析………………… 22

4.1 GIg 的分离纯化………

4.2.兔抗鹅 GIg 的免疫血清的制备及应用………

4.3. GIg 特性研究………… 27

5.小结… 36

第三章

五龙鹅免疫系统发育规律研究………………… 37

1.引言… 37

2.试验设计…………………… 37

2.1 免疫系统发育规律的研究……………………

2.2 试验路线……………… 38

3 材料与方法………………… 39

3.1 试验材料……………… 39

3.2 五龙鹅免疫系统发育规律的研究……………

3.3 五龙鹅血浆总蛋白消长规律与成分研究……

3.5 HA-HI 测定体液 GPMV 抗体效价…………

3 . 6 建立间接 E LIS A 方法 — —用于检测五龙鹅 G Ig 含量……………

3.7 数据处理……………… 41

4.结果与分析………………… 41

4.1 五龙鹅免疫器官的动态研究………………… 41

4.2 五龙鹅免疫细胞变化规律……………………

4.3 五龙鹅血浆总蛋白消长规律与成分研究……

4.4 五龙鹅体液抗体消长规律……………………

5 小结…… 54

全文结论…… 56

参考文献…… 58

附录………… 67

致谢………… 71

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