[硕士论文] 微型月季离体再生体系建立及化学诱变育种研究 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-微型月季离体再生体系建立及化学诱变育种研究，共75页，40068字

摘 要

微型月季（Rosa chinensis var.Minima）是蔷薇科蔷薇属多年生木本植物，是

近几年世界花卉市场上的新宠，受到各国人民的普遍喜爱。生产规模的扩大对微型

月季种苗繁殖技术提出了更高的要求。目前生产者多用扦插法繁殖微型月季，由于

其植株低矮，枝条细小，用扦插法繁殖存在繁殖系数低，成本高的缺点，影响了生

产规模的进一步扩大。组织培养具有繁殖系数高，速度快，成本低等优点，可以在

短时间内获得大量的商品苗，这对于推广新品种，迅速占领市场，具有十分重要的

意义。微型月季的组织培养研究既可以解决种苗繁殖的问题，又可以结合各种育种

手段进行新品种的培育。目前对微型月季的组织培养多采用腋芽快繁途径，对愈伤

组织诱导植株再生途径研究较少。

本文以微型月季品种‘小女孩’为试验材料，在前人研究的基础上，对腋芽

再生途径进行优化，并着重研究通过愈伤组织诱导形成再生芽的途径，从而建立起

微型月季的离体再生体系，同时利用叠氮钠对微型月季进行化学诱变处理。结果表

明：

微型月季离体再生体系建立外植体以 5 月、9 月从田间生长旺盛的微型月季

当年生枝上具有饱满腋芽的枝条为最佳。为减少污染和褐化，接种时不带叶柄。

微型月季初代培养的培养基为 MS＋6-BA 2mg/L＋NAA 0.3mg/L，其腋芽启动

率可达 81.1％。

微型月季继代培养培养基为 MS+ 6-BA 5mg/L＋NAA0.1mg/L＋GA31mg/L，其

芽增殖系数可达 5.7。继代 3 次可达最大增殖系数 6.6。

微型月季愈伤组织诱导最适外植体为幼叶和幼叶柄，其平均诱导率分别为

61.38％和 54.88％。在 MS 培养基上附加 2，4－D 浓度为 1.0mg/L 时其诱导率可达

81.35％；在 MS 培养基上附加 NAA 浓度为 1.0mg/L 时其诱导率可达 64.08％。

微 型 月 季 愈 伤 组 织 芽 分 化 适 宜 处 理 为 MS+6-BA7.0mg/L+NAA0.3mg/L

+KT0.2mg/L 幼叶。

微型月季试管苗生根阶段的最适培养基为 1/2MS＋NAA0.1mg/L＋6-BA0.5

mg/L＋活性炭 0.5 g/L，生根率可达 99.5％，生根多，生长迅速。

将微型月季组培苗在生根培养基上培养 14d 后，取主茎上生根部分做成石蜡切

片，观察结果表明根原基起源于茎的维管形成层部分；在增值阶段，取即将产生不

定芽的部位做成石蜡切片，观察结果表明芽原基起源于茎的中柱。

化学诱变处理结果表明，200mg/L NaN3 处理 2h 可作为微型月季幼芽叶节的诱

变处理。经化学诱变处理后的微型月季再生苗较未经处理的其叶片和叶柄均发生较

大的变异，表现为叶片变小，叶柄伸长，叶脉更明显，叶色变红等。

关键词：微型月季；离体再生；化学诱变育种

目 录

摘要 …………ⅰ

英文摘要 ……ⅲ

缩略词 ………ⅷ

一、前言……1

1. 微型月季研究进展 ………1

1.1 微型月季育种研究简史… 1

1.2.微型月季概况… …………2

1.2.1 生物学概况 ……………3

1.2.2 生态习性… ……………3

1.2.3 园林应用 ………………3

1.3 微型月季繁殖的研究 ……4

1.3.1 微型月季扦插繁殖的研究… ……………4

1.3.2 微型月季组织培养的研究 ………………6

1.3.2.1 无菌体系的建立…… …… ……………6

1.3.2.2 初代培养

1.3.2.3 诱导生根

……………7

……………8

1.3.2.4 组织学观察

1.3.2.5 驯化与移栽

…………8

…………9

1.4 微型月季栽培技术研究 …9

1.5 微型月季产后的研究……10

1.6 微型月季育种目标………11

2.植物离体再生体系变异研究进展 …………12

2.1 植物离体再生体系变异的来源……………12

2.2.影响植物离体再生系变异的因素…………13

2.3 植物离体再生体系变异的检测……………15

2.4 植物离体再生体系变异在育种中的应用…15

3.化学诱变育种研究进展 …16

3.1 化学诱变特点……………16

3.2 化学诱变剂种类…………17

3.3 植物化学诱变育种成就…17

4.试验研究目的和意义 ……18

二、试验设计、材料和方法

1.试验材料 20

2.试验方案 20

2.1 初代培养试验……………20

2.2 继代培养试验……………21

2.3 愈伤组织丛芽途径增殖试验 ……………21

2.3.1 愈伤组织的诱导试验…21

2.3.2.愈伤组织的继代试验…22

2.3.3.愈伤组织的分化试验…22

2.3.4.芽分化后的继代试验…23

2.4 壮苗和生根培养试验……24

2.5 组培苗不定根、不定芽的组织学观察……24

2.6 驯化与移栽………………24

2.7 叠氮钠（NaN3）诱变处理25

2.8 结果统计分析方法………25

三、结果与分析

1 初代培养 26

1.1 初代培养中影响腋芽萌发的因素…………26

1.1.1 不同取材时期对微型月季腋芽萌发的影响………………26

1.1.2 不同接种方式对微型月季腋芽萌发的影响………………27

1.1.3 不同激素及培养基对微型月季初代培养的影响…………27

1.2 初代培养中外植体的表现30

1.3 初代培养中的变异………30

1.4 初代培养中变异原因及利用………………30

2 继代培养 31

2.1 侧芽途径继代增殖………31

2.2 继代增殖阶段外植体的表现………………32

3 愈伤组织丛芽途径试验 …33

3.1 愈伤组织的诱导…………33

3.2 愈伤组织的继代…………36

3.3 愈伤组织分化……………37

3.4 芽分化后的继代…………38

4 壮苗和生根 ………………39

5 组培苗不定根、不定芽的组织学观察………41

5.1 不定根的起源……………42

5.2 不定芽的起源……………42

6 叠氮钠（NaN3）诱变处理…42

6.1 不同浓度 NaN3 对丛生芽诱导的影响……42

6.2 不同处理时间对丛生芽诱导的影响………42

6.3 不同浓度 NaN3 对愈伤组织芽诱导的影响43

四、讨论

1.外植体的取材时期 ………45

2.初代培养中的变异问题 …45

3.激素的影响 ………………45

4.培养基的影响 ……………46

5.植物离体培养中花芽诱导 46

6.微型月季愈伤组织途径再生和腋芽再生途径的比较… ……47

7.植物组织培养在观赏植物育种中的应用… 48

8.化学诱变育种研究 ………48

五、结论 …50

参考文献 …51

致谢 ………57

图版 A ……58

图版 B ……63

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