[硕士论文] 大肠杆菌噬菌体的分离鉴定与初步应用 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-大肠杆菌噬菌体的分离鉴定与初步应用，共60页，35244字

摘 要

鸡的大肠杆菌病是在世界范围内影响家禽业发展的主要细菌病之一，本病在鸡群中

普遍流行，给养禽生产带来巨大的经济损失。本研究以 35 株禽源致病性大肠杆菌为宿

主菌，进行了噬菌体的分离，并对噬菌体分离株进行了生物学特性的测定以及雏鸡大肠

杆菌病治疗试验。

采用纸片扩散法测定4株大肠杆菌分离株对药物的耐药性，采用动物试验法测定4株

大肠杆菌的致病性并筛选出一株毒力最强的细菌进行半数致死量的测定，结果表明，菌

O15和菌O24对药物的耐药性最强，耐药率为70.6%，4株细菌对头孢唑啉非常敏感，对氨

苄青霉素、阿莫西林、卡那霉素、四环素、萘啶酸、恩诺沙星、环丙沙星和红霉素等8

种药物表现出完全耐药性；大肠杆菌分离株O24毒力最强，对7日龄雏鸡的半数致死量为

6.6×107cfu。

以 35 株大肠杆菌分离株为宿主菌，采用双层琼脂平板法分离、鉴定、纯化噬菌体，

并测定噬菌体的效价，对噬菌体的裂解谱进行了测定。结果共分离出 5 株噬菌体，分别

命名为 Bp2、Bp3、Bp4、Bp5 和 Bp6；噬菌体效价较高，均可达 108pfu/mL 以上；Bp4

对致病性大肠杆菌的裂解谱最宽，其宽噬率为 34.3%；Bp6 和 Bp5 的宽噬率分别为 8.6%；

而 Bp2 和 Bp3 的宽噬率分别为 3.8%。

将噬菌体Bp6增殖纯化后进行电镜观察，并测定其热稳定性、pH值稳定性、最佳感

染复数（MOI）和一步生长曲线。结果：头部为立体对称，直径约48nm，尾长约100nm，

属肌尾噬菌体科；在60℃作用60min及在pH4.5~9.0的环境下作用2h仍可保持较高裂解活

性；MOI为0.001；感染宿主菌的潜伏期为25min~27min，爆发期为15min，平均裂解量

为83.8。

通过噬菌体 Bp6 的毒性试验来验证噬菌体的安全性，并通过噬菌体治疗试验来检测

噬菌体治疗雏鸡大肠杆菌病的效果。结果表明，噬菌体 Bp6 悬液对雏鸡是安全的，在感

染致病性大肠杆菌前 3h 给雏鸡气囊接种 6×108pfu 噬菌体，雏鸡的死亡率由 90%降至

20%，而皮下接种相同剂量的噬菌体，雏鸡的死亡率由 90%降至 70%。因此气囊接种是

预防雏鸡大肠杆菌感染的最理想的接种方法。

关键词：鸡；大肠杆菌；噬菌体；生物学特性；治疗

目录

摘要……Ⅰ

英文摘要………Ⅱ

缩略词表………Ⅳ

第一章文献综述1

第二章试验研究17

试验一：大肠杆菌病动物模型的建立……………17

1 材料与方法17

2 结果与分析20

3 讨论………23

试验二：大肠杆菌噬菌体的分离与裂解谱的测定24

1 材料与方法24

2 结果与分析27

3 讨论………29

试验三：噬菌体生物学特性的测定………………30

1 材料与方法30

2 结果与分析33

3 讨论………37

试验四：噬菌体治疗大肠杆菌病的研究…………38

1 材料与方法38

2 结果与分析40

3 讨论………44

结论…… 45

参考文献 46

发表文章 49

致谢……………50

导师组意见……………… 51

学位论文独创性声明…… 52

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