[硕士论文] O型口蹄疫病毒VP1蛋白的原核表达及反应原性检测 [复制链接]

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硕士论文-O型口蹄疫病毒VP1蛋白的原核表达及反应原性检测，共54页，28126字

摘 要

1、根据 GenBank 中已发表的 FMDV 毒株 VP1 的基因序列，设计并合成一对能扩增

639bp 基因片段引物，引物两端分别加 BamHⅠ和 NotⅠ酶切位点。用 PCR 的方法扩增得

到 VP1 基因，将其克隆到 pMD18-T Vector 进行序列测定。用分子生物学软件对本试验

测定的 FMDV VP1 基因序列与 GenBank 已公布的 O 型 FMDV VP1 基因序列进行同源性比较，

结果显示扩增到的 VP1 基因序列与 GenBank 已公布的 O 型 FMDV VP1 的基因序列的同源

性较高均在 93%以上，其中与 CHA 株、LAO 株、MOG 株和 RUS 株同源性在 98%以上。对重

组克隆质粒 PTVP1 进行双酶切得到 639bp 的目的片段，将其以正确阅读框架定向插入

pET-32a（+）中，然后转化至 E.coli BL21（DE3），于 30℃以 1mmol/L 的 IPTG 诱导，

发现 VP1 基因得到了高效表达，且表达产物分子量约为 48KD。

2、将高效表达的目的蛋白经超声波裂解，取沉淀和上清分别进行可溶性分析，发

现表达蛋白以包涵体的形式存在。表达的重组蛋白变性、纯化、复性后，经蛋白免疫印

迹（Western-Blot）分析和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测，发现该融合蛋白具

有较好的反应原性，为进一步研制口蹄疫基因工程疫苗和诊断试剂盒奠定基础。

关键词：口蹄疫病毒；VP1 基因；基因克隆；原核表达；反应原性

目录

中文摘要

英文摘要

缩略符号

前言……

文献综述

1 FMDV 的分类地位及形态特征……

2 FMDV 基因组的结构特征…………

3 FMDV 的结构蛋白及其功能………

4 FMDV 的遗传变异…

5 口蹄疫诊断技术研究

6 口蹄疫疫苗的研制…

试验内容

1 口蹄疫病毒 VP1 基因的克隆及原核表达…………

1.1 材料

1.2 方法

1.3 结果

1.4 讨论

2 表达的口蹄疫病毒 VP1 蛋白反应原性的检测…

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

参考文献

全文总结

附录……

致谢……

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