[硕士论文] 刺参弧菌病病原菌分离、鉴定及防治研究 [复制链接]

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硕士论文-刺参弧菌病病原菌分离、鉴定及防治研究，共69页，36941字

摘 要

1 本试验分离鉴定了青岛地区三个养殖场发病刺参携带的 18 株细菌，经 PCR 筛选、

生理生化鉴定，其中 A-1、A-2、A-4 为美人鱼弧菌，A-10、A-11、A-12 为海蛹弧菌，A-9

为副溶血弧菌，A-3、A-5、A-6 为杀鲑气单胞菌史氏亚种，A-7、A-8 为松鼠葡萄球菌，

A-13、A-17、A-18 为海单胞菌，A-14、A-15、A-16 为交替单胞菌。

2 将 18 株分离菌进行回归试验，三株美人鱼弧菌可以引起刺参发病。比较了浸染、

创伤感染、注射三种方式，证明创伤感染是引起刺参发病的主要途径；注射方式致死刺

参速度最快，创伤方式次之，浸染方式最慢。18 株细菌混合后可以引起刺参死亡率增加，

可能细菌之间有协同作用。病原菌在溶氧 5.0mg/L 的条件下对刺参的致死率比 8.0mg/L

条件下明显上升，说明溶氧对刺参发病有很大影响。三株病原菌适宜生长条件为盐度 10

‰～50‰， pH5～10，16℃～28℃。

3 药敏试验显示环丙沙星，依诺沙星，恩诺沙星，红霉素，壮观霉素，左氧氟沙星，

链霉素对三株美人鱼弧菌都有较强抑制作用，进一步测定了敏感药物的 MIC、MBC。大蒜

汁对两株美人鱼弧菌 A-1，A-4 有较强杀灭作用，但是对 A-2 株没有抑制效果。成功筛

选到 1 株乳酸菌，命名为 B-1 株，生理生化鉴定为嗜酸乳杆菌。其胞外产物对美人鱼弧

菌具有较好的抑制作用，并且进一步探讨了胞外产物的抑菌特性，该菌株的抑菌成分对

热不敏感，蛋白酶 K 对其活性有较大影响。成分可能是细菌素。研究了 B-1 株产生的细

菌素量和生长曲线的关系；比较了吐温 80、聚乙二醇 6000、吐温 20 三种刺激因子对 B-1

株产细菌素的影响，证明吐温 80 效果最好，并确定了最佳加入量为 0.15%。确定了 B-1

株 37℃培养温度细菌素产量最大。

关键词：美人鱼弧菌；刺参；细菌素；乳酸杆菌

目 录

中文摘要………Ⅰ

英文摘要………Ⅱ

缩略符号………Ⅲ

1 绪论 …………1

1.1 研究的目的和意义 ……1

1.2 弧菌和弧菌病研究现状 1

1.2.1 弧菌和弧菌病概述 …1

1.2.2 弧菌致病机理 ………2

1.3 弧菌病防治方法 ………3

1.3.1 鱼类弧菌病疫苗免疫 3

1.3.2 免疫增强剂的使用 …5

1.3.3 药物治疗 7

1.3.4 生物防治 8

1.3.5 乳酸菌的抑菌研究 …9

2 病原菌的分离鉴定………12

2.1 材料与方法12

2.1.1 试验材料12

2.1.2 试验方法12

2.1.2.1 刺参携带菌的分离12

2.1.2.2 刺参携带菌的鉴定12

2.1.2.3 分离菌回归试验…13

2.1.2.4 病原菌生长特性的初步研究…13

2.2 结果………14

2.2.1 刺参携带菌的分离…14

2.2.2 刺参携带菌的鉴定…14

2.2.3 分离菌回归试验……23

2.2.4 病原菌生长特性的初步研究……26

2.3 讨论………32

3 防治方法的研究…………34

3.1 材料和方法34

3.1.1 试验材料34

3.1.2 试验方法34

3.1.2.1 药敏试验…………34

3.1.2.2 大蒜汁的抑菌作用35

3.1.2.3 乳酸菌的抑菌研究36

3.2 结果………37

3.2.1 药敏试验结果………37

3.2.2 大蒜对病原菌的抑制作用………39

3.2.3 乳酸菌的抑制效果…40

3.3 讨论………45

参考文献………48

全文总结………55

致谢56

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