[硕士论文] 四个绵羊品种MHC-DRB3基因外显子2的多态性分析 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-四个绵羊品种MHC-DRB3基因外显子2的多态性分析，共69页，27495字

摘 要

主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex，MHC)由紧密连锁、高度

多态的基因位点所组成的染色体上的一个区域，广泛存在于所有脊椎动物，具有高度的

多态性和保守性。MHC 编码蛋白称为 MHC 抗原或 MHC 分子，分布在各种细胞的表面，

是一类细胞表面转膜糖蛋白，在动物机体的免疫系统中发挥着非常重要的作用，不仅与

动物的抗病性有较强的相关，而且对许多重要经济性状也有一定影响。将 MHC 与分子

生物学、免疫遗传学、群体遗传学等相结合研究，将成为畜禽遗传育种，尤其是抗病育

种领域的焦点。MHC 基因由 I 类 II 类和 III 类基因组成，II 类基因含 DQ、DO、DR 等

亚区。高度表达的 DRB3 基因座位的第二外显子是 MHC 中功能最重要的区域，其多态

性最丰富，成为 MHC 研究热点。

本研究利用生物信息学与群体遗传学、分子生物学技术相结合的方法，以 4 个绵羊

品种（阿勒泰羊、中国美利奴肉用多胎羊、湖羊和无角道塞特羊）为实验材料，对其

MHC-DRB3 基因外显子 2 的多态性及群体遗传结构进行研究，取得了如下结果：

1．本文采用 PCR-RFLP 方法对四个绵羊品种的 MHC-DRB3 基因第二外显子多态性

进行了初步研究,发现 Pst I 和 Taq I 酶切结果均为三种基因型，受两个等位基因（A、B）

控制；HaeIII 酶切基因型有 18 种，受 7 个复等位基因（A、B、C、D、E、F 和 H）控

制。本研究发现内切酶 Pst I 的酶切位点（241bp）为一个新的碱基突变点，发生了 A-T

颠换。

2．计算了四个绵羊品种的基因杂合度和多态信息含量。四个品种的基因杂合度在

0.693~0.774 之间，多态信息含量在 0.662~0.738 之间。四个品种基因杂合度和多态信息

含量值均大于 0.5，其中以湖羊最高，表现高度多态性，也说明这四个品种具有丰富的

遗传多样性。

3．χ2 适合性检验，结果表明：四个品种 MHC-DRB3 基因的第 2 外显子的 Pst I 酶切

位 点 均 达 到 了 Hardy-Weinberg 平 衡 状 态 ， TaqI 和 HaeIII 酶 切 位 点 均 未 达 到

Hardy-Weinberg 平衡状态。

4．根据等位基因频率计算四个品种的遗传距离，并进行聚类分析，结果表明：中

国美利奴肉用多胎羊和湖羊亲缘关系最近，这个结果与这两个品种的来源、育成史以及

遗传构成背景是一致的。

5．通过对四个绵羊品种 MHC-DRB3 基因核苷酸以及氨基酸序列之间的同源性比较

可以看出，它们之间的同源性很高；其中湖羊和中国美利奴肉用多胎羊之间的同源性达

到了 100% 。

关键词：绵羊；MHC-DRB3；PCR-RFLP；多态性

目录

中文摘要 ......... 1

英文摘要.......... 3

英文缩写词表.. 5

文献综述 ......... 6

前言............ 6

MHC 的结构和功能............ 7

MHC 的应用........... 9

MHC 分子的遗传特性..... 11

绵羊 MHC 的研究 12

本研究的目的与意义........ 14

研究内容........ 16

材料和方法........... 16

1.1 试验动物. 16

1.2 主要试剂及来源.. 16

1.3 质粒和菌株.......... 17

1.4 主要试验设备及来源....... 17

1.5 常用溶液及配制.. 17

试验方法.. 21

基因组 DNA 的提取及检测 ....... 22

PCR 扩增 ........... 22

PCR 产物的酶切和电泳检测 ..... 23

PCR 产物纯化、克隆 .... 24

测序....... 27

2.6 统计方法与分析软件..... 27

结果与分析........... 28

基因组 DNA 的提取与检测 ....... 28

PCR 扩增 ........... 29

酶切....... 29

3.4 基因外显子 2 多态性研究.......... 31

MHC-DRB3 等位基因种类 ..... 31

MHC-DRB3 基因位点 Hardy-Weinberg 平衡检验........ 33

基因杂合度和多态信息含量... 34

绵羊群体间的遗传距离和聚类分析 .... 34

MHC-DRB3 基因 PCR 扩增区的克隆测序与分析.......... 35

插入片段的检测.......... 35

测序结果......... 36

3.5.3 四个绵羊品种 MHC-DRB3 基因的核苷酸序列进行同源性比较.......... 36

四个品种绵羊 MHC-DRB3 基因氨基酸序列的同源性比较 .... 39

结论............ 45

讨论.......... 42

参考文献........ 46

附录............ 51

致谢............ 55

攻读硕士期间发表的论文...... 56

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