[硕士论文] 小鼠MⅡ期卵母细胞体外受精与孤雌激活 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-小鼠MⅡ期卵母细胞体外受精与孤雌激活，共59页，33957字

摘

要

对小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的研究，有助于揭示小鼠卵母细胞活化

机制，为提高核移植效率和优化胚胎体外生产系统提供理论依据。

本试验在小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的基础上，重点研究体外受精影

响因素、胚胎培养、化学激活方法及对比孤雌激活胚与体外受精胚的早期发育。为随后

的核移植、转基因、干细胞研究提供必需的技术路线和试验依据。

结果如下：

1.分析体外受精过程中的各种影响因素，探讨精子获能液、成熟卵子的采集时间、

方法及处理方法对小鼠体外受精效果的影响。试验 I, HTF 与 mKSOM 获能液均适用于小

鼠体外受精，差异不显著（P＞0.05）。试验 II,注射 hCG 后 13-15h 采集的卵母细胞受

精率高于 17h（P＜0.05），而 2-细胞发育率差异不显著（P＞0.05）。试验 III,用透明

质酸酶处理对成熟卵母细胞受精率和卵裂率影响不大，与不处理组差异不显著（P＞

0.05）。试验 IV,自然周期卵组与超排卵组的受精率无明显差异，但自然周期卵 2-细胞

发育率较高，差异显著（P＜0.05）。

2.分析 LIF 对体外受精及体外受精胚早期发育的影响，以观察其在精子获能及早期

胚胎体外发育中的调控及作用机理。获能液中添加 0.1-10ng/ml 浓度 LIF 后，精子活力、

卵母细胞受精率没有显著提高，与对照组差异不显著（P﹥0.05），但当浓度为 100ng/ml

时，明显低于对照组（P﹤0.01）。培养液中添加 0.1-25ng/ml 浓度的 LIF 能提高 8-细

胞期的比例，但与对照组差异不显著（P﹥0.05），添加 50ng/ml、100ng/ml 组囊胚发育

率与对照组差异显著（P﹤0.05）。而 0.1ng/ml LIF 处理组扩张囊胚发育率、孵化囊胚

率显著高于其他试验组与对照组（P﹤0.05），其他组作用不明显。

3.采用不同化学激活方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活研究。分别采用氯化锶与细

胞松弛素B(CB)，钙离子载体A23187 和乙醇分别与 6-二甲氨基嘌呤（6-DMAP）和CB联

合的方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活。在几种化学激活方法中，乙醇联合 6-DMAP +CB

与A23187 联合 6-DMAP+CB的激活率、桑椹胚、囊胚率效果较好，15 mmol/L SrcL2联合

CB处理效果次之，为核移植后小鼠重构卵的激活提供了技术参数。

4.比较体外受精胚与孤雌激活胚在相同的体外培养条件下的发育率与发育速度，探

讨是否可以用孤雌激活技术代替体外受精技术来检测体外培养系统。在相同条件下，孤

雌激活胚与体外受精胚卵裂率差异显著（P﹤0.05），而桑椹胚与囊胚发育率差异不显著

（P﹥0.05）；在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚的囊胚出现时间基本一致，且囊

胚发育的总体比率差异不显著（P﹥0.05）。

关键词：

MII 期卵母细胞；

孤雌激活；

体外受精；

胚胎培养；

白血病抑制因子；

小鼠

目录

中文摘要.......... 1

英文摘要.......... 3

英文缩写注释.. 5

第一部分 文献综述. 6

综述：哺乳动物体外受精与孤雌激活的研究进展........ 6

前言....... 6

1 体外受精....... 7

1.1 卵母细胞的体外成熟 ..... 7

1.2 精子获能... 8

1.2.1 受精作用机制.. 8

1.2.2 精子体外获能.. 9

1.3 影响精子体外获能与受精的因素 ..... 10

2.卵母细胞的孤雌激活...... 11

2.1 卵母细胞孤雌激活的方法 ...... 11

2.2 卵母细胞活化的主要途径 ..... 11

2.3 孤雌激活胚胎的发育 ... 13

3.胚胎体外培养系统.......... 13

3.1 早期胚胎代谢.... 13

3.2 胚体基因组的启动....... 14

3.3 早期胚胎发育阻滞与超越 ...... 14

3.4 早期胚胎体外培养系统 .......... 14

4.小结与展望 18

第二部分 试验研究. 20

试验一、影响小鼠体外受精的的因素.. 20

1 材料与方法.......... 20

2 试验设计... 22

3 试验结果... 22

4 讨论.. 25

试验二、LIF 对小鼠精子获能及早期胚胎发育的影响.......... 27

1 材料与方法. 27

2 试验设计..... 28

3 试验结果..... 29

4 讨论.. 31

试验三、化学激活对小鼠卵母细胞孤雌发育的影响.. 33

1 材料与方法. 33

2 试验设计..... 34

3 试验结果..... 34

4 讨论.. 37

试验四、小鼠 MII 期卵母细胞孤雌激活卵与体外受精卵发育比较 39

1 材料与方法. 39

2 试验设计..... 40

3 试验结果..... 40

4 讨论.. 41

结论........ 42

参考文献........ 43

附录.......... 49

致谢.......... 51

导师组意见.... 52

学位论文独创性声明及学位论文版权使用授权书...... 53

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