[毕业论文] 环介导等温扩增技术检测CEA基因在肺癌细胞中的表达 [复制链接]

资料简介：

毕业论文-环介导等温扩增技术检测CEA基因在肺癌细胞中的表达，共77页，24593字

中文摘要

目的：癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）是判断非小细胞性肺癌

（NSCLC）进展、分期和提示预后的重要肿瘤标志物。运用逆转录环介导等温扩

增（RT-LAMP）技术和微流体芯片技术，建立一个快速、准确地判断 CEA mRNA

表达，从而判断 NSCLC 进展的分子诊断检测技术平台。

方法：培养非小细胞性肺癌细胞 H460，进行逆转录环介导等温扩增反应检测

CEA mRNA 的表达，并优化引物、反应体系和反应条件，采用微流体芯片在超小

体积 RT-LAMP 检测 CEA mRNA 的表达。

结果：逆转录环介导等温扩增反应在 50 分钟内检测出 CEA mRNA 在 NSCLC

细胞中的特异性表达。优化后的引物设计、反应体系和实验条件能明显提升等温

扩增效果，减少二聚体的产生，提高 mRNA 分子检测鉴定的特异性和准确性，比

文献报道的国外学者完成的引物设计和反应体系效果更好。基于微流体芯片成功

地实现了超小体积 RT-LAMP（5μL）快速检测 CEA mRNA 在 NSCLC 细胞中的特

异性表达。

结论：常规 RT-PCR 方法需要≥25μL 以上反应体积，检测时间≥90 分钟。本

研究通过逆转录环介导等温扩增技术能快速、准确地判断 CEA mRNA 的表达。

基于微流体芯片的 RT-LAMP 能实现在超小体积反应体系（5μL）中准确地判断

CEA mRNA 的表达，检测时间缩短了近 1 倍，具有良好的应用前景。

关键词 ：非小细胞肺癌；癌胚抗原；逆转录环介导等温扩增；微流体芯片

 

ABSTRACT

Objective: CEA (carcinoembryonic antigen) is one of the most significant tumor

markers for judging the progression and neoplasm staging of non-small cell lung

cancer (NSCLC), as well as for prognosis. Utilizing reverse transcription

loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) technology and microfluidic chip

technology, a molecular diagnosis platform is developed to detect the CEA mRNA

expression rapidly and accurately, thus determine the NSCLC progression.

Methods: After culturing non-small cell lung cancer cells H460, the expression of

CEA mRNA was analyzed using reverse transcription loop-mediated isothermal

amplification. Primers, reaction system and reaction conditions were optimized. Then

based on a microfluidic chip, CEA mRNA expression was analyzed applying

ultra-small volume RT-LAMP.

Results: Specific expression of CEA mRNA in NSCLC cells was detected in 50

mins by RT-Lamp. Optimized primers, reaction system and conditions could

significantly improve isothermal amplification effect and restrain the dimmers, thus

improve the specificity and accurency of molecular diagnosis of mRNA, which has

been proved to be better than primers and reaction system reported in a paper of

foreign scholar. Specific expression of CEA mRNA in NSCLC cells was also

successfully detected by ultra-small volume RT-LAMP based on microfluidic chips.

Conclusion: Common RT-PCR requires reaction mixture no less than 25μL and at

least 90mins for amplification.In my study，the RT-LAMP method can rapidly and

accurately judge the expression of CEA mRNA. Microfluidic chip-based RT-LAMP,

can diagnose the expression of CEA mRNA accurately in the ultra-small volume

reaction system (5μL), in half the time, thus has a good application prospect.

Keywords： nonsmall cell lung cancer (NSCLC); carcinoembryonic antigen

(CEA); reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP);

microfluidic chip

 

目录

第 1 章

引 言 ..1

1.1 研究背景 .1

1.1.1 肺癌诊断的研究现状 ........1

1.1.2 癌胚抗原的表达在肺癌诊断中的意义 ..3

1.1.3 环介导的等温扩增技术 ....6

1.1.4 微流体芯片技术 .....9

1.2 课题任务 ......... 10

1.3 关于本文 ......... 10

第 2 章 实验材料、仪器和方法 .. 11

2.1 实验材料 ......... 11

2.2 实验试剂 ......... 11

2.3 主要试剂配置方法 .... 12

2.4 主要仪器 ......... 13

2.5 LAMP 引物设计 ......... 13

2.5.1 引物方案一 . 13

2.5.2 引物方案二的靶序列获取 ......... 15

2.5.3 方案二引物设计及验证 .. 16

2.6 实验方法和步骤 ........ 23

2.6.1 细胞培养 ..... 24

2.6.2 细胞总 RNA 的提取 ........ 24

2.6.3 RT-LAMP 反应扩增 CEA-mRNA......... 25

2.6.4 电泳检测扩增结果 26

第 3 章 实验结果和讨论 ... 27

3.1 RNA 提取结果 .. 27

3.2 不同浓度样本的 LAMP 扩增结果 . 29

3.3 扩增温度对 LAMP 扩增效果的影响 ....... 30

3.4 逆转录酶对 LAMP 扩增效果的影响 ....... 33

3.5 引物设计分析和对比 . 34

第 4 章 基于微流体芯片的 RT-LAMP 实验 .... 44

4.1 实验材料 ......... 44

4.2 主要仪器 ......... 44

4.3 实验方法和步骤 ........ 44

4.3.1 引物设计 ..... 44

4.3.2 微流体芯片的制备 45

4.3.3 微流体芯片等温扩增检测系统 . 47

4.4 实验结果 ......... 48

第 5 章 结论和展望 . 51

插图索引 ......... 52

表格索引 ......... 54

参考文献 ......... 55

致 谢 ..... 58

声 明 ..... 59

附录 A 外文资料的调研阅读报告 60

资料文件预览：
共1文件夹，1个文件，文件总大小：6.98MB，压缩后大小：2.97MB

• 毕业论文-环介导等温扩增技术检测CEA基因在肺癌细胞中的表达
• 毕业论文-环介导等温扩增技术检测CEA基因在肺癌细胞中的表达.doc  [6.98MB]