[硕士论文] 树舌灵芝活性物质提取及抗肿瘤活性研究 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-树舌灵芝活性物质提取及抗肿瘤活性研究，共85页，37640字

摘要

本文主要研究了树舌灵芝多糖的单糖组分和分子量分布，确定了树舌灵芝总三萜的

提取方法，并测定了不同方法提取的树舌灵芝子实体和发酵液总三萜的含量，以及树舌

灵芝生物碱组成及醇溶、醇沉酸性组分，并研究其抗肿瘤活性。

本文首先研究了树舌灵芝多糖提取物单糖组分和多糖分子量分布。结果表明： 树

舌灵芝多糖主要含有甘露糖、盐酸氨基葡萄糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖及半乳糖

5 种单糖，不同样品含其他单糖的种类和含量有所差异。本文所采用的 5 个样品分别含

有 4，4，2，3，3 个不同分子量的多糖组分，其重均分子量分别为 793548.95 Da，

47375.92Da，642745.11 Da，664844.7 Da，678912.91 Da。

本文研究了树舌灵芝总三萜的测定方法，确定了总三萜的测定的最佳条件为：5%

香草醛-冰醋酸用量 0.2 mL，高氯酸用量1.0 mL， 70 ℃水浴25 min。经测定，醇沉物中

三萜含量为0.049 mg/g，而醇溶物中其含量仅为0.022 mg/g。

从树舌灵芝子实体提取三萜的pH条件实验发现：萃取液pH5.00时三萜的含量最高；

发酵液pH6.00时提取液中三萜的含量最多，可达到0.6mg/mL以上。

利用GC-MS对树舌灵芝提取物组分分析结果表明：

树舌灵芝发酵液醇溶物中共检测出7种生物碱，分别为吡咯类1种，哌嗪类1种，酰

胺类5种；发酵液醇沉物中共检测出13种生物碱，分别为亚胺类1种，吡咯类1种，酰胺

类7种，哌嗪类1种，苯胺1种，咪唑类1种，吡嗪类1种。

在醇溶酸性组分提取物中共鉴定出 7 种成分，其中有机酸 1 种，酰胺 2 种，呋喃类

1 种，酚类 3 种；在醇沉酸性组分提取物中共鉴定出 11 种组分，其中有机酸 1 种，呋喃

类 2 种，酚类 2 种，醇类 2 种，烯类 1 种，咪唑类 1 种，酯类 2 种。

提取物抗肿瘤研究表明：

三个浓度树舌灵芝子实体提取物对 H22 细胞的抑制率分别达到了 26.28%、61.71%

和 42.26%（接种一天后给药）；7 天后给药组，三种剂量梯度对肿瘤抑制率分别达到了

32.44%、48.69%和 58.74%。三个浓度树舌灵芝子实体提取物对 S180 细胞的抑制率分别

达到了 15.73%、52.48%和 48.51%。

三萜及生物碱提取物对SGC细胞的抑制率都达到了50%以上，醇溶物的三萜提取物

在100μg/mL的抑制率最高，达到了80%以上。三萜和生物碱提取物对Hep细胞的抑制效

果，最高为57.1%；同树舌灵芝粗提物相比，三萜和生物碱提取物的抗肿瘤效果明显高

于树舌灵芝的粗提物。

关键词：树舌灵芝；多糖；三萜；生物碱；抗肿瘤

目录

摘要..........I

Abstract........ II

第一章 绪论....... 1

1 树舌的化学成分........... 1

1.1 树舌灵芝多糖 ..... 1

1. 2 树舌中甾体化合物 ............. 3

1. 3 三萜类化合物 .... 3

1. 4 脂类 . 4

1. 5 其他化学成分 .... 4

2 树舌灵芝生物活性研究 ................ 5

2.1 提高免疫力 ......... 5

2.2 抗肿瘤 5

2.3 抗病毒 5

2.4 抗菌消炎 ............. 6

2.5 其他药理活性 ..... 6

第二章 树舌灵芝多糖分子量分布及其单糖组分的研究....... 8

1 材料与方法.. 8

1.1 试剂 . 8

1.2 仪器 . 8

1.3 方法 . 8

2 结果与分析................ 10

2.1 单糖组分测定 .... 10

2.2 多糖分子量分布测定 ......... 15

第三章 树舌灵芝总三萜测定方法的研究............ 18

1 材料与方法 18

1.1 试剂 ................ 18

1.2 仪器 ................ 18

1.3 总三萜测定条件的选择 .... 18

1.4 正交试验 ........... 19

1.5 标准曲线的制作 ................ 19

1.6 精密度测定 ....... 19

2 结果与分析 20

2.1 总三萜的测定条件 ............ 20

2.2 正交试验结果 ... 22

2.3 标准曲线的制作 ................ 24

2.4 精密度测定 ....... 24

3 讨论............ 24

第四章 树舌灵芝发酵液提取物总三萜的提取及测定......... 25

1 材料与方法 25

1.1 仪器与药品 ....... 25

1.2 材料 ................ 25

1.3 试验方法 ........... 25

1.4 总三萜定性检测 ................ 27

1.5 总三萜定量测定 ................ 27

1.6 加样回收率测定 ................ 27

2 结果与分析 28

2.1 三萜的定性检测 ................ 28

2.2 总三萜的定量测定结果 .... 29

3 讨论............ 30

第五章 树舌灵芝子实体和发酵液不同 pH 条件提取三萜的研究 ...... 31

1 材料与方法 31

1.1 仪器与药品 ....... 31

1.2 材料 ................ 31

1.3 子实体提取方法的选择 .... 31

2 结果与分析 33

2.1 树舌灵芝子实体三萜提取条件的选择 .............. 33

2.2 子实体提取三萜含量的测定结果 ..... 35

2.3 发酵液提取液三萜含量测定 ............. 36

3 讨论............ 37

第六章 树舌灵芝发酵液生物碱成分分析............ 38

1 材料与方法 38

1.1 仪器与药品 ....... 38

1.2 材料 ................ 38

1.3 实验方法 ........... 38

2 结果与分析 40

2.1 醇溶物中生物碱的 GC-MS 分析结果................ 40

2.2 醇沉物中生物碱的 GC-MS 分析结果................ 43

3 讨论............ 48

第七章 树舌灵芝醇溶、醇沉酸性组分分析........ 49

1 材料与方法 49

1.1 仪器与药品 ....... 49

1.2 材料 ................ 49

1.3 实验方法 ........... 49

2 结果与分析 51

2.1 ESAC 的 GC-MS 分析结果 ................ 51

2.2 醇沉酸性组分分析 ............ 53

第八章 树舌灵芝菌株抗肿瘤活性的研究............ 57

1 材料与方法 57

1.1 试验材料 ........... 57

1.2 试验方法 ........... 57

2 结果与分析 58

2.1 对实体瘤 H22 的抑制作用 . 58

2.2 各个剂量的药物对小鼠体重变化的影响 .......... 59

ii

2.3 对实体瘤 S180 的抑制作用 60

2.4 对实体瘤 S180 小鼠体重的影响 ......... 61

3 结论与讨论 62

3.1 结论 ................ 62

3.2 讨论 ................ 62

第九章 三萜和生物碱抗肿瘤活性测定................ 63

1 材料和方法. 63

1.1实验材料........ 63

1.2 溶液的配制 ....... 63

1.3 肿瘤细胞的培养 ................ 64

1.4 试验方法 ........... 64

2 结果与分析 65

2.1 三萜和生物碱提取物对 SGC 和 Hep 肿瘤细胞的抑制作用 .............. 65

2.2 树舌粗提物对两种肿瘤细胞的影响 . 66

2.3 树舌灵芝三萜和生物碱提取物对正常来源的人肝细胞的影响......... 67

3 讨论............ 68

第十章 结论和讨论.............. 69

1 结论............ 69

1.1 树舌灵芝多糖单糖组分及分子量分布的测定 .. 69

1.2 树舌灵芝总三萜测定方法的研究 ..... 69

1.3 树舌灵芝发酵液提取物总三萜的提取剂测定 .. 69

1.4 树舌灵芝子实体和发酵液不同 pH 条件提取三萜的研究. 69

1.5 树舌灵芝发酵液生物碱成分分析 ..... 70

1.6 树舌灵芝醇溶、醇沉酸性组分分析 . 70

1.7 树舌灵芝抗肿瘤活性的研究 ............. 70

1.8 三萜和生物碱抗肿瘤活性测定 ......... 70

2 讨论............ 70

2.1 关于试验结果 ... 70

2.2 本研究的未尽事宜和不足之处 ......... 71

2.3 进一步研究的方法和建议 . 71

参考文献....... 72

致谢....... 76

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