[硕士论文] 不同培养体系对牛卵母细胞体外成熟及克隆胚发育率的影响 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-不同培养体系对牛卵母细胞体外成熟及克隆胚发育率的影响，共57页，29379字

摘 要

本研究中，试验一：探讨了不同的因素对牛卵母细胞体外成熟的影响，目的是筛选

出一套适合本实验室条件下细胞核移植的卵母细胞体外培养成熟体系；试验二：探讨了

不同的培养条件对牛核移植重构胚体外发育的影响，目的是优化牛核移植重构胚的体外

培养体系，进一步提高牛核移植重构胚的体外发育率和胚胎的质量。

结果如下：

1、试验一：探讨了卵泡直径(2-4mm、4-6mm、6-8mm、＞8mm)、成熟培养时间、卵

巢性周期以及卵丘细胞对牛卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：2mm≤D≤8mm 的卵泡

中的卵母细胞成熟率明显高于 8mm＜D 卵泡中的卵母细胞的成熟率 (P<0.05)。将随机分

成三组的卵母细胞分别培养 18h(Ⅰ组)、 22h(Ⅱ组)和 24h(Ⅲ组)，Ⅰ组成熟率(68.2%)

显著低于Ⅱ组(78%)和Ⅲ组(81.8%)(P<0.05)。采集卵泡期卵巢中的卵母细胞进行体外成

熟培养，卵母细胞的体外成熟率（81.7%）要明显高于黄体期卵巢中卵母细胞的体外成

熟率（70.6%）(P<0.05)。卵丘—卵母细胞复合体(COCs)的质量影响卵母细胞的体外成

熟，A、B、C 三级卵母细胞成熟率分别是 87.3%、76.2%、29.2%，AB 之间差异显著(P<0.05)，

均与 C 差异极显著(P<0.01)。

2、试验二：探讨了不同的培养条件对牛核移植重构胚体外发育的影响。分为 4 个

小试验。试验Ⅰ：探讨谷光甘肽对牛核移植重构胚体外发育能力的影响，试验组 A 中添

加 1mM 谷胱甘肽，核移植重构胚在体外培养 7d,核移植重构胚的桑椹胚率(17.0%)、囊

胚率(8.5%)明显的提高与对照组（1.3%、1.3%)差异显著（p<0.05）；试验Ⅱ：探讨低氧

气浓度（5%）对牛核移植重构胚体外发育能力的影响，核移植重构胚在体外培养 7d,试

验组 A 0-3d 核移植重构胚采用低氧气浓度（5%）条件培养，桑椹胚率（11.8%）、囊胚

率(7.8%)明显的提高与对照组(1.3%、1.3%)差异显著（p<0.05）；试验Ⅲ：探讨不同的

供体细胞对牛核移植重构胚体外发育的影响，核移植重构胚在体外培养 6d，两个试验

组(A 和 B)的桑椹胚率都超过 50%，早期囊胚率都超过 20%，桑椹胚率和早期囊胚率都明

显提高并且两个试验组之间差异不明显（p>0.05）；试验Ⅳ：初步探讨不同供体细胞对

牛核移植重构胚移植后妊娠率的影响，试验组 B（牛骨髓间充质干细胞）妊娠牛头数（妊

娠 80d）多于试验组 A（牛胎儿肌细胞），具体的原因还将进一步研究。

关键词：

牛；体外成熟；供体细胞；核移植；胚胎培养

目录

中文摘要............... Ⅰ

英文摘要 .............. Ⅱ

英文缩写注释....... Ⅲ

第一部分

文献综述.............. 1

前言........ 1

1 卵母细胞的体外成熟........... 1

1.1 卵母细胞成熟的特征....... 2

1.2 影响卵母细胞体外成熟的因素........ 2

1.3 卵母细胞体外成熟的技术路线....... 3

2 哺乳动物体细胞核移植的研究进展.... 4

2.1 牛体细胞核移植的研究进展............ 4

2.2 其它动物的体细胞核移植的研究进展............. 5

2.3 哺乳动物异种体细胞核移植的研究进展......... 6

2.4 我国核移植的研究进展... 6

2.5 核移植的技术路线........... 7

3 影响哺乳动物体细胞核移植的因素.... 8

3.1 供体细胞的种类............... 8

3.2 供体细胞的细胞周期....... 8

3.3 供体细胞的传代次数....... 8

3.4 供体年龄的影响............... 9

3.5 卵母细胞的去核效果....... 9

3.6 受体胞质的成熟程度..... 10

3.7 核移植重构胚的体外培养系统...... 10

4 体细胞核移植机理的研究进展.......... 11

4.1 核仁及细胞核的变化..... 11

4.2 核质运输........ 12

4.3 DNA 的甲基化与组蛋白的乙酰化... 12

4.4 端粒与端粒酶 13

4.5 印记基因及 X-染色体失活............. 13

5 哺乳动物体细胞核移植研究存在的问题及应用前景........ 14

5.1 体细胞核移植研究中存在的问题.. 14

5.2 体细胞核移植研究的应用前景....... 15

第二部分 试验研究.............. 16

试验一 影响牛卵母细胞体外成熟因素的研究.... 16

1．材料 16

2．试验方法......... 17

3．试验结果与分析.............. 19

4．讨论 23

试验二 不同的培养条件对牛核移植重构胚体外发育的影响.............. 25

1．材料 25

2．试验方法......... 27

3．试验结果与分析.............. 30

4．讨论 34

结论 ..... 36

参考文献 .............. 37

致谢 ..... 44

导师组意见 .......... 45

学位论文独创性声明及学位论文版权使用授权书............... 46

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