[硕士论文] 牛骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定试验 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-牛骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定试验，共61页，31602字

摘 要

目的：

本试验旨在分离、纯化牛 BMSCs，可以作为体细胞克隆的核供体细胞来源，

应用于动物遗传资源保存。

方法：

本试验共分为两个部分。试验 I：研究了不同月龄牛 BMSCs 分离培养的效

果。试验Ⅱ：采用全骨髓法和 Percoll 密度梯度离心法来分离纯化和体外培养

牛 BMSCs；并测定了原代及传代细胞的生长曲线；同时研究了不同培养基和血

清对 BMSCs 生长的影响；另外通过形态学观察、碱性磷酸酶染色和诱导分化三

种方法对 BMSCs 进行了初步鉴定。

结果

6 月龄组牛 BMSCs 的增殖能力高于 12 月龄组和 18 月龄组；6 月龄组原代

BMSCs 的克隆集落形成率显著高于 12 月龄组和 18 月龄组。6 月龄荷斯坦奶牛骨

髓中的 MSCs 适宜于分离培养。

全骨髓法与 Percoll 密度梯度离心法均获得了形态均一、细胞纯度较高的骨

髓间充质干细胞，第三代时其细胞纯度可达 99%以上。

对各代细胞进行形态学观察和瑞士-姬姆萨染色结果可以看出 BMSCs 各代之

间形态较一致；对其进行碱性磷酸酶染色阳性结果为阳性，证明了所得细胞为纯

度较高的 BMSCs；在体外诱导条件下能够分化为脂肪样细胞，初步证明了 BMSCs

具有分化潜能。

关键词：牛 骨髓间充质干细胞 分离 培养 初步鉴定

目录

摘要……..………Ⅰ

英文摘要…..……Ⅱ

英文缩写注释………………………..………Ⅲ

前言与综述…………………………...………1

前言…...…………1

骨髓间充质干细胞研究进展…...……………2

1 骨髓间充质干细胞的发现和研究历史………………...………………2

2 骨髓间充质干细胞的概念………………...3

3 骨髓间充质干细胞和骨髓基质细胞的异同..…………………………3

4 骨髓间充质干细胞的生物学形状…………………………...…………4

5 骨髓间充质干细胞的分离培养与扩增…………………………...……6

6 骨髓间充质干细胞的鉴定…………...……7

7 骨髓间充质干细胞的多向分化潜能…...…8

8 骨髓间充质干细胞的临床应用…………...11

9 骨髓间充质干细胞存在的问题和应用前景...…………………………14

试验内容…………...…………………………16

1 不同月龄牛骨髓间充质干细胞分离培养效果的研究……...…………...………………………….16

1.1 材料与方法…………………………....…16

1.1.1 材料………16

1.1.2 试验方法…17

1.2 结果与分析…19

1.2.1 不同月龄牛骨髓间充质干细胞原代培养观察结果………………19

1.2.2 不同月龄牛骨髓间充质干细胞传代培养观察结果………………20

1.2.3 不同月龄牛骨髓间充质干细胞的增殖能力………………………20

1.2.4 不同月龄牛骨髓间充质干细胞的集落形成率……………………21

1.3 讨论…………23

2 牛骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定…………...............…………24

2.1 材料与方法…24

2.1.1 材料………24

2.1.2 试验方法…24

2.2 结果与分析…………………………...…28

2.2.1 牛骨髓间充质干细胞原代培养形态学观察结果…..……………..28

2.2.2 牛骨髓间充质干细胞传代培养形态学观察结果…………………29

2.2.3 原代及传代牛骨髓间充质干细胞生长曲线………………………31

2.2.4 牛骨髓间充质干细胞的体外扩增速度33

2.2.5 瑞士-姬姆萨染色结果………………..33

2.2.6 碱性磷酸酶染色结果…………………35

2.2.7 牛骨髓间充质干细胞分化为脂肪 …..36

2.3 讨论…………37

2.3.1 骨髓间充质干细胞的分离和培养……37

2.3.2 骨髓间充质干细胞的生长特性………38

2.3.3 骨髓间充质干细胞染色………………39

2.3.4 牛骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞39

结论…...…………40

参考文献…………………………...…………41

附录...……………47

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