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硕士论文-山东PCV2全基因序列分析及含CpG的PCV2ORF2 的真核表达载体的构建和表达，共58页，27924字

摘 要

猪圆环病毒2型（Porcine cricovirus type 2, PCV2）为无囊膜的单股环状负链DNA

病毒，属圆环病毒科，与断奶仔猪多系统衰竭综合征(post weaning multisystemic

wasting syndrome, PMWS)密切相关, 1991年在加拿大首次暴发, 随后世界许多国家和

地区流行, 给养猪业造成严重的经济损失。

为了在分子水平上揭示山东PCV2流行的来源及遗传学背景，并为山东省PCV2的防治

提供一种安全有效的手段，本研究在课题组对山东省PCV2血清学调查的基础上，根据

GenBank中发表的猪圆环病毒2型（PCV2）全基因序列（Gene bank accession numberbr />
40985(20)），设计一对特异性引物，用PCR方法直接从在山东地区采集的血清学检测为

阳性的病料中分别扩增出两株PCV2毒株的全基因组，进行了序列测定，分别命名为SD-1

株(DQ346683)和SD-2株(DQ478947)，结果表明，SD-1株全基因组核苷酸长度为1767bp，

SD-2株全基因组核苷酸长度为1768 bp。应用DNAstar分析表明，本实验得到的两株PCV2

的全基因序列与世界上其它地区的PCV2分离株的全基因序列同源性高达93.9%-99.7%，

ORF1基因序列的同源性为96.9%-99.7%，ORF2基因序列的同源性为91.2%-99.9%。

本研究以 PCV2 SD1 株（DQ346683）的 DNA 为 PCR 模板，扩增得到编码 PCV2 结构蛋

白的 ORF2 基因，在课题组对适合猪的 CpG-ODN 筛选研究的基础上，将 ORF2 基因和一段

含有 18 个 CpG 基序的 150bp 长的 CpG 序列分别插入了真核表达载体 pVAX1 的多克隆位

点和骨架结构中，得到了重组真核表达载体 pVAX1-ORF2-CpG，并在哺乳动物细胞中对

ORF2 基因进行了体外表达试验，用间接免疫荧光方法对表达蛋白的免疫原性进行了初步

检测。结果表明，本研究构建的含 CpG 的 PCV2ORF2 的真核表达载体 pVAX1-ORF2-CpG 在

哺乳动物细胞中得到成功表达。

关键词：圆环病毒 2 型； 全序列分析；ORF2；CpG 基序；DNA 疫苗

目录

摘要……… I

英文摘要…… II

英文缩写词表………… III

前言 ………… 1

文献综述

1.PCV 文献综述 …………… 2

2.CpG 文献综述 …………… 8

研究报告

1. 山东 PMWS 病猪 PCV2 全基因组序列分析

1.1 材料与方法 ……………13

1.2 结果…… 16

1.3 讨论…………… 23

2．含 CpG 基序的 PCV2 ORF2 真核表达载体的构建及真核表达

2.1 材料与方法 26

2.2 结果…… 32

2.3 讨论…………… 36

结论………… 37

参考文献…… 38

发表文章………… 44

附录………… 45

致谢………… 47

导师组意见

学位论文独创性声明 ………49

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• 硕士论文-山东PCV2全基因序列分析及含CpG的PCV2ORF2 的真核表达载体的构建和表达
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