[硕士论文] 猪血清免疫球蛋白制备及免疫球蛋白对仔猪腹泻的影响 [复制链接]

资料简介：

硕士论文-猪血清免疫球蛋白制备及免疫球蛋白对仔猪腹泻的影响，共60页，27654字

摘要

免疫球蛋白（Immunoglobulin，简称 Ig）在动物体内具有重要的免疫和生理调节作

用，是动物体内免疫系统最为关键的组成物质之一。国内外大量研究报道免疫球蛋白可

以防治婴幼儿大肠杆菌性腹泻和轮状病毒性腹泻，也能防治仔猪腹泻，加入牙膏中能够

预防和治疗龋齿。我国猪血资源十分丰富，但是并未得到很好的利用，为实现猪血的“变

废为宝”充分开发免疫球蛋白资源，本试验比较了三种血清免疫球蛋白的提取方法；通

过纯化后，对 IgG 轻链和重链的分子量进行了测定；规模化生产免疫球蛋白之前，检测

了免疫球蛋白对仔猪腹泻的影响。试验结果如下所述：

1 不同方法提取猪血清 Ig

在本试验中，选用辛酸法、辛酸-硫酸铵法和硫酸铵分步法从猪血清中提取 Ig，然

后对这三种方法提取的 Ig 的浓度、纯度及提取时效性进行比较，结果显示：硫酸铵分

步法提取的蛋白浓度最高，辛酸-硫酸铵法次之，辛酸法提取的浓度最低；辛酸-硫酸铵

法提取的 IgG 纯度最高、辛酸法次之，硫酸铵分步法纯度最低；三种提取方法时效性比

较，硫酸铵分步法耗时最短，辛酸法次之，而辛酸-硫酸铵法耗时最长。

2 猪血清 IgG 的提纯及其分子量的测定

本试验对 3 个猪血清样品采用分步硫酸铵盐析法粗提取猪血清中的 IgG，透析袋脱

盐，DEAE-SephadexA50 对 IgG 进行纯化，然后对纯化后的 IgG 进行 SDS-PAGE 电泳，

通过 AlphaEaseFC 凝胶分析软件对凝胶进行分析。结果显示：电泳后获得猪 IgG 的重链

（H 链）和轻链（L 链），与标准蛋白 Marker 比较，测得 H 链的分子量约为 56KDa，L

链分子量约 26KDa。

3 口服 Ig 对仔猪腹泻及体重的影响

选择 120 头初生仔猪作为实验动物。实验分三个组：a 组、b 组和 c 组，口服剂量

分别为 0mL、5mL 和 10mL，出生后口服免疫球蛋白，每 3h 口服 1 次，共口服 8 次，

24h 内完成，观察 28d，评估免疫球蛋白对仔猪增重和腹泻的影响。结果显示，口服免

疫球蛋白可以明显地提高仔猪增重和减轻腹泻，且能提高成活率；前 14d 比后 14d 效果

好；10ml 组比 5ml 组效果更突出。

关键词：血清；免疫球蛋白；提取；仔猪；腹泻

目录

摘要..............i

ABSTRACT ...ii

符号说明........iv

前言. 1

文献综述......... 2

1 Ig 与抗体的区别 ......... 2

2 Ig 的结构与分类 ......... 2

2.1 单体分子结构.......... 2

2.2 种类.......... 5

2.3 五类 Ig 的功能 ........ 6

2.4 功能区...... 8

2.5 水解片段.. 8

3 动物胎盘结构与 Ig 转移的关系 ............... 9

4 Ig 吸收研究 ............... 11

4.1 吸收部位研究......... 11

4.2 吸收规律研究......... 11

5 Ig 稳定性研究 ........... 11

5.1 体外稳定性研究.... 11

5.2 消化道内稳定性研究............ 13

6 Ig 的来源及其应用 ... 14

6.1 初乳应用 14

6.2 卵黄 Ig 应用 .......... 14

6.3 血液制品应用........ 14

7 猪血组成及其开发现状........... 15

7.1 猪血组成 15

7.2 猪血资源开发现状 15

8 本研究的意义........... 16

9 创新点....... 16

试验一 三种方法提取猪血清免疫球蛋白. 17

1 材料........... 17

1.1 试验药品 17

1.2 试验仪器 17

1.3 试液的配制............ 17

2 方法........... 18

2.1 猪血清的制备........ 18

2.2 IgG 不同提取方法 . 18

2.3 IgG 透析 . 19

2.4 不同方法提取免疫球蛋白的效果比较 19

3 结果........... 20

3.1 IgG 含量比较 ......... 20

3.2 IgG 纯度比较 ......... 21

3.3 IgG 提取效率比较 . 22

4 讨论........... 22

4.1 辛酸提取法............ 22

4.2 硫酸铵分步提取法 22

4.3 辛酸-硫酸铵提取法 .............. 23

试验二 猪血清 IgG 提纯及其分子量测定  24

1 材料........... 24

1.1 试验试剂 24

1.2 试验仪器 24

2 方法........... 24

2.1 猪血清制备............ 24

2.2 硫酸铵分步提取法提取 IgG（50%-33%-33%）............... 24

2.3 透析除盐 24

2.4 DEAE-SephadexA50 纯化 Ig 25

2.5 IgG 纯度检测及其分子量测定 ............. 25

2.6 紫外分光法检测蛋白浓度.... 25

3 结果........... 26

3.1 IgG 纯度及其分子量结果 ..... 26

3.2 紫外分光法检测蛋白浓度结果............. 27

4 讨论........... 27

4.1 Ig 提取方法 ............ 27

4.2 柱层析的选择........ 27

试验三 口服 Ig 对仔猪腹泻及体重的影响 ............... 29

1 材料........... 29

1.1 试验时间及地点.... 29

1.2 药物提供 29

1.3 试验动物 29

2 方法........... 30

2.1 动物分组与管理.... 30

2.2 数据记录与处理.... 30

3 结果........... 30

3.1 Ig 对体重的影响 .... 30

3.2 Ig 对仔猪腹泻和死亡率的影响 ............ 31

4 讨论........... 32

4.1 Ig 对仔猪腹泻及体重的影响  32

4.2 口服 Ig 时间的选择 .............. 32

结 论............. 33

参考文献....... 34

附录一 透析袋的预处理............. 39

附录二 垂直板 SDS-PAGE 电泳 ............... 40

附录三 硫酸铵饱和度配制表..... 42

致 谢............. 44

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