[硕士论文] 牙鲆和石鲽血液指标测定、血细胞形态观察及核型分析 [复制链接]

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硕士论文-牙鲆和石鲽血液指标测定、血细胞形态观察及核型分析，共61页，38165字

摘要

本试验以牙鲆和石鲽为研究对象，应用常规的血液学指标测定方法和血细胞涂片法,

测定二者的血液学指标，并观察其血细胞形态；采用外周血细胞培养法制备染色体标本，

经 Giemsa 染色、镜检、拍照后进行核型分析。研究结果如下：

1. 牙鲆的红细胞密度为(2.44±0.14)×106 个/mm3 ；白细胞密度为(3.28±0.45)×104 个

/mm3 ；血红蛋白含量为(6.27±0.42) g/100mL； 红细胞渗透脆性为(0.45±0.01) g%；沉降

率为(5.73± 0.25) mm/h。石鲽的红细胞密度为(2.84±0.26)×106 个/mm3 ；白细胞密度为

(5.30±0.14)×105 个/mm3 ；血红蛋白含量为(6.44±0.15) g/100mL； 红细胞渗透脆性为

(0.45±0.05) g%；沉降率为(4.57± 0.07) mm/h。

2. 采用外周血液进行涂片观察，在涂片上可区分出牙鲆和石鲽的红细胞和 5 种白

细胞，他们分别是淋巴细胞、血栓细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞，未

见嗜碱性粒细胞。其中淋巴细胞的体积最小，单核细胞的体积最大；在白细胞中，淋巴

细胞数量最多，其次是血栓细胞，嗜酸性粒细胞的数量最少；此外还可见正在分裂的红

细胞，说明红细胞可在外周血中直接分裂。

3. 采用外周血细胞培养法制备染色体标本，用 RPMI 1640 全血培养基进行培养，

从血液保存时间、刺激源 PHA（植物血球凝集素）和 ConA（刀豆蛋白 A）等方面对外

周血细胞的培养及其染色体制备条件进行探讨，建立较成熟的外周血淋巴细胞培养及染

色体制备的方法。结果表明：血液在 4℃保存 3d 后细胞仍可正常生长，ConA 和 PHA 两

种刺激源均能促进外周血细胞的分裂增殖，从血细胞形态和白细胞数目来看，以 ConA

为刺激源的作用效果好于以 PHA 为刺激源的作用效果，培养时间以 72h 最好。牙鲆

血细胞在 21℃，以终浓度为 0.1 mg/mL 的 ConA 为刺激源培养 72 h，在结束培养前 4 h

加入终浓度 1.5 μg/mL 秋水仙素，低渗 35 min 可获得较好的染色体分裂相。石鲽血细胞

在 16℃，以终浓度为 0.1 mg/mL 的 ConA 为刺激源培养 72 h，在结束培养前 4 h 加入终

浓度 0.6 μg/mL 秋水仙素，低渗 35 min 可获得较好的染色体分裂相。

4. 核型分析结果表明：牙鲆和石鲽的染色体核型均为 2n=48,48t, 即 24 对染色体均

为端着丝粒染色体，臂数为 NF=48，未发现多倍体现象，也未发现性染色体和随体。

关键词：牙鲆；石鲽；血液指标；血细胞；染色体；核型

目录

中文摘要……1

英文摘要……2

英文缩略对照表………………4

引言……………5

第一章 文献综述 ……………7

1 鱼类血液指标和血细胞的研究进展…………7

1.1 鱼类血液指标的研究进展7

1.2 鱼类血细胞的研究进展…8

1.2.1 红细胞8

1.2.2 白细胞9

2 鱼类染色体的研究进展……11

2.1 鱼类染色体制备方法的研究进展…………11

2.2 鱼类染色体核型的研究进展………………13

第二章 血液指标测定及血细胞特点 …………19

1 试验材料…19

1.1 试验动物19

1.2 试验仪器19

1.3 主要试剂及溶液配制……19

1.3.1 主要试剂………………19

1.3.2 主要试剂的配制………19

2 试验方法 20

2.1 红细胞沉降速率的测定…20

2.2 血红蛋白含量的测定……20

2.3 红细胞渗透脆性的测定…20

2.4 血细胞计数………………21

2.5 血细胞形态的观察………23

3 试验结果与分析……………23

3.1 血液指标测定结果………23

3.2 血细胞形态………………24

4 讨论………26

4.1 血液指标26

4.2 血细胞的组成与形态……27

4.3 采血的影响………………28

第三章 染色体核型分析………29

1 试验材料…29

1.1 试验动物…29

1.2 试验仪器…29

1.3 主要试剂及溶液配制………29

1.3.1 主要试剂29

1.3.2 主要试剂的配制…………30

2 试验方法…31

2.1 采血及保存31

2.2 外周血细胞体外培养…31

2.3 外周血细胞培养制备染色体标本………31

2.4 核型分析…31

3 试验结果与分析……………32

3.1 血液保存时间………………32

3.2 血细胞培养时间……………32

3.3 PHA 和 ConA 两种刺激源的作用……………32

3.4 外周血细胞培养制备染色体标本的条件……36

3.4.1 牙鲆染色体标本的制备条件………………36

3.4.2 石鲽染色体标本的制备条件………………36

3.5 染色体核型分析……………36

3.5.1 石鲽染色体核型分析……36

3.5.2 牙鲆染色体核型分析 …37

4 讨论…38

4.1 血液保存时间……………38

4.2 血细胞培养温度…………38

4.3 PHA 和 ConA 两种刺激源的作用…………39

4.4 染色体标本的制备………39

4.5 染色体核型………………40

结论…………42

参考文献……43

致谢…………48

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