[硕士论文] 鲁加6号柱型苹果离体叶片再生植株的研究 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-鲁加6号柱型苹果离体叶片再生植株的研究，共65页，35542字

摘要

本试验于 2006 年至 2008 年在青岛农业大学进行，以柱型苹果新品种“鲁加 6 号”

（Malus domestica cv. Lujia 6）为试材，优化了初代培养条件，筛选了试管苗增殖培养

基，研究了离体叶片再生条件和试管苗生根条件，建立了高频、稳定的叶片再生植株技

术体系。主要取得了以下研究结果：

1、优化了柱型苹果“鲁加 6 号”的初代培养条件，获得了试管苗

研究表明，在外植体接种芽度过自然休眠后，早春芽体开始活动，但鳞片尚未展开

时接种，可以有效降低污染，加入 4g·L-1PVP 可以有效防止褐化。“鲁加 6 号”苹果的增

殖培养条件为：培养温度 25±2℃，光强 2000Lx，光照时间 16h/d。基本培养基为 MS

培养基，最佳培养基激素配比分别为：6-BA1.0mg·L-1+ NAA 0.2mg·L-1。

2、获得了柱型苹果“鲁加 6 号”高频、稳定的叶片再生不定芽技术体系

通过研究基本培养基、激素种类及浓度配比、暗培养、接种方式及外植体苗龄对“鲁

加 6”叶片再生不定芽的影响，建立了最佳叶片再生不定芽体系，即：培养基为

MS+6-BA4.0mg·l-1+NAA0.1mg·L-1+蔗糖 30g·L-1＋琼脂 7g·L-1。选择 25-30d 苗龄的叶色

嫩绿、长势较强的叶片作为外植体可以显著提高再生频率。暗培养两周能明显提高叶片

的再生的能力。叶片的正反面接种方式对叶片再生没有显著影响。采用最佳叶片再生体

系，“鲁加 6 号”再生频率可达 91.3%，平均再生芽数达 3.8 个。

3、建立了柱型苹果“鲁加 6 号”高效生根体系

通过对影响生根的培养基种类、激素种类和浓度等因素的研究，建立了柱型苹果“鲁

加 6 号”最佳生根培养基，即：1/2MS+0.3mg·l-1IAA+1.0mg·l-1IBA。试验结果表明，“鲁

加 6 号”在 1/2MS+IAA0.5mg·l-1 培养基中，虽然生根数很多，生根频率很高，但侧根数

较少，根的质量明显不如采用 IAA 和 IBA 组合处理。“鲁加 6 号”在半量 MS 培养基中

生根的数量和质量优于 MS 培养基和改良 White 培养基。用三种生长素 IAA、NAA、IBA

处理表明，IAA 处理的试管苗基部直接生根，IBA 和 NAA 处理的试管苗都是先生成愈

伤组织，然后从愈伤组织上生出根来。正交试验结果表明，影响“鲁加 6 号”生根的主次

因素顺序为 IAA>IBA>NAA。在最佳生根体系中，“鲁加 6 号”生根率可达 100%，平均

生根数达到 8.9 根。

关键词：柱型苹果；鲁加 6 号；叶片再生；生根；试管苗

目 录

中文摘要...1

英文摘要...2

缩略词.......4

前言...........1

第一章 文献综述......3

1 苹果再生体系的研究进展......4

1.1 器官培养..............4

1.2 胚培养.5

1.3 原生质体培养......5

2 影响苹果离体叶片再生的因素...............5

2.1 外在因素..............6

2.1.1 基本培养基对叶片再生的影响.........6

2.1.2 植物激素种类及浓度对叶片再生的影响 ..........6

2.1.3 暗培养对叶片再生的影响7

2.1.4 继代代数对叶片再生的影响.............7

2.1.5 叶片放置方式对叶片再生的影响.....7

2.1.6 添加物对叶片再生的影响8

2.1.7 外植体的处理方法............8

2.1.8 其它影响因素...8

2.2 内在因素..............9

2.2.1 基因型对叶片再生的影响9

2.2.2 叶片来源...........9

2.2.3 叶片成熟度.......9

2.2.4 叶片不同部位...9

3 不定芽的发生途径................10

4 苹果生根的研究进展............10

4.1 基本培养基对苹果生根的影响..........10

4.2 植物生长调节剂对生根的影响..........11

4.3 糖类...11

5 研究的目的和意义................11

第二章 试管苗的获得和增殖培养..........12

1 材料与方法...........12

1.1 试验材料............12

1.1.1 植物材料.........12

1.1.2 生化试剂.........12

1.2 试验方法............12

1.2.1 外植体的消毒.12

1.2.2 防止褐变的研究..............13

1.2.3 激素对试管苗增殖生长的研究.......13

1.2.4 试验条件.........14

2 结果与分析...........14

2.1 试管苗的获得....14

2.2 防止褐变的效果15

2.3 激素对继代苗增殖生长的影响..........15

3 讨论......16

3.1 试管苗的获取....16

3.2 防止外植体的褐变.............17

3.3 试管苗增殖研究17

第三章 柱型苹果“鲁加 6 号”叶片再生的研究 .......19

1 材料和方法...........19

1.1 试验材料............19

1.1.1 植物材料.........19

1.1.2 生化试剂.........19

1.2 方法...19

1.2.1 基本培养基的筛选..........19

1.2.2 激素对苹果离体叶片再生不定芽的影响 ........19

1.2.3 叶片放置方式对叶片再生不定芽的影响 ........20

1.2.4 暗培养时间对苹果离体叶片再生不定芽频率的影响 .....20

1.2.5 苗龄对叶片再生不定芽的影响.......20

1.3 实验室培养条件20

1.4 叶片再生不定芽效率的评价指标及方法 ...........20

2 结果与分析...........21

2.1 基本培养基的选择.............21

2.2 不同激素组合对苹果离体叶片再生不定芽频率的影响 ....21

2.2.1“鲁加 6 号”苹果叶片再生过程的观察 .............21

2.2.2 叶片再生不定芽的最佳激素组合...22

2.3 叶片放置方式对“鲁加 6 号”叶片再生的影响 ...23

2.4“鲁加 6 号”叶片再生不定芽适宜暗培养时间的确定..........24

2.5 苗龄对“鲁加 6 号”叶片再生不定芽的影响 .......25

3 讨论......26

3.1 基因型对苹果叶片再生不定芽的影响...............26

3.2 生长调节剂对叶片再生不定芽的影响...............26

3.3 暗培养对叶片再生不定芽的作用......27

3.4 放置方式对叶片再生不定芽的影响..27

3.5 苗龄对叶片再生不定芽的影响..........27

第四章 柱型苹果“鲁加 6 号”生根体系的研究 .......28

1 材料与方法...........28

1.1 试验材料............28

1.1.1 植物材料.........28

1.1.2 生化试剂.........28

1.2 试验方法............28

1.2.1 基本培养基的选择..........28

1.2.2 生长素种类和浓度的选择...............28

1.3 测量标准与数据处理方法.29

2 结果与分析..........30

2.1 基本培养基的选择.............30

2.2 单一生长素对苹果组培苗诱导生根的效应 .......30

2.2.1 单一生长素诱导“鲁加 6 号”组培苗生根的效应..............30

2.2.2 单一生长素对“富士”组培苗的生根效应 ........32

2.3 生长素组合对“鲁加 6 号”组培苗诱导生根的效应.............33

3 讨论......35

3.1 基本培养基对生根的影响.35

3.2 生长调节剂对苹果生根的影响..........35

3.3 基因型对苹果生根的影响.36

结 论.......37

参考文献.39

附录 I ......44

附录Ⅱ.....47

致 谢.......48

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