[硕士论文] 侧柏农用抑菌活性物质的研究 [复制链接]

资料简介：
硕士论文-侧柏农用抑菌活性物质的研究，共58页，28563字

摘要

本文以侧柏(Platycladus orentalis（L.）Franco)叶为主要研究对象，采用生长速率法

作为活性追踪方法，对侧柏叶中的农用抑菌活性物质进行提取、分离、纯化和结构鉴定，

得到抑菌作用较高的活性物质 8-甲基苯并吡喃-2-酮（8-甲基香豆素）。主要研究结果如

下：

1．采用菌丝生长速率法测定了侧柏叶、小枝、球果和种子乙醇提取物的抑菌作用。

结果表明：在供试浓度为 50mg/mL（相当于干样）时，侧柏各器官对供试菌种均有一定

的抑菌活性，其中叶提取物的活性最好，对供试苹果腐烂病菌（Valsa mali）、葡萄白腐

病菌（Coniothyrium diplodiella）、葡萄黑痘病菌（Elsinoe ampelina）、番茄绵腐病菌

（ Phytophthora melongenae）和青霉病菌（ Penicillium expansum）的 EC50 分别为：

0.2200mg/mL、5.424mg/mL、3.186 mg/mL、8.913 mg/mL 和 19.00mg/mL。

2．测定了侧柏叶乙醇提取物 3 种溶剂（石油醚、乙酸乙酯、正丁醇）萃取物和萃

余水相的农用抑菌活性，结果显示，乙酸乙酯萃取物在供试浓度为 0.5mg/mL 时对苹果

腐烂病菌（V. mali）和葡萄黑痘病菌（E. ampelina）的抑菌效果较好,其抑制率分别为

81.88%和 64.06%。

3．采用硅胶柱层析法对乙酸乙酯萃取物中的抑菌活性物质进一步分离后，得到单

体活性化合物 A，经鉴定为 8-甲基苯并吡喃-2-酮（8-甲基香豆素），测得其对苹果腐烂

病菌（V. mali）、葡萄黑痘病菌（E. ampelina）的 EC50 分别为 0.039mg/mL 和 0.23mg/mL 。

抑菌活性相比叶乙醇提取物分别提高了 5.67 倍和 13.85 倍。

关键词：侧柏；抑菌活性；８－甲基苯并吡喃-2-酮（8-甲基香豆素）；

摘要. 2

Abstract........... 2

前言. 3

文献综述.. 5

生物杀菌剂的研究进展... 5

1.1.1 微生物源杀菌剂研究进展............ 5

1.1.1.1 农用抗生素....... 5

1.1.1.2 细菌杀菌剂....... 5

1.1.1.3 真菌杀菌剂....... 6

1.1.2 动物源杀菌剂研究进展... 6

1.1.3 植物源杀菌剂的研究进展............ 6

1.1.3.1 抑菌活性植物资源........ 6

1.1.3.2 植物中的主要抑菌活性成分..... 9

1.1.3.3 商品化的植物源杀菌剂品种... 12

1.1.3.4 抑菌植物资源研究开发意义... 14

1.1.3.5 植物源有效成分的提取、分离和结构鉴定.... 14

1.2 侧柏化学成分及生物活性研究进展.......... 14

1.2.1 侧柏化学成分的研究概况.......... 14

1.2.1.1 侧柏挥发性化学成分的研究概况........ 14

1.2.1.2 侧柏非挥发性化学成分的研究............ 16

1.2.2 侧柏生物活性的研究..... 17

1.2.2.1 止血作用......... 17

1.2.2.2 抗炎作用......... 18

1.2.2.3 抗肿瘤活性..... 18

1.2.2.4 抑菌活性........ 18

1.2.2.5 其它功效......... 18

二 材料与方法........... 19

2.1 材料......... 19

2.1.1 供试菌种......... 19

2.1.1.1 供试真菌......... 19

2.1.1.2 供试细菌......... 19

2.1.2 供试材料......... 20

2.1.3 仪器与试剂....... 20

2.1.3.1 仪器.... 20

2.1.3.2 供试试剂......... 20

2.2 实验方法............ 21

2.2.1 生物活性测定方法......... 21

2.2.1.1 PDA 培养基的制作 .... 21

2.2.1.2 细菌培养基的制作..... 21

2.2.1.3 培养基的灭菌 21

2.2.1.4 真菌菌丝生长速率法....... 21

2.2.1.5 细菌抑菌圈法. 22

2.2.2 试验方法............ 22

2.2.2.1 侧柏各器官乙醇提取物的抑菌活性比较......... 22

2.2.2.2 侧柏叶乙醇提取物农用抑菌活性........ 22

2.2.2.3 侧柏叶抑菌活性成分的提取... 22

2.2.2.4 侧柏叶乙醇提取物 3 种溶剂萃取物的制备..... 23

2.2.2.5 乙酸乙酯萃取物柱层析分离... 23

2.2.2.6 化合物 A 的抑菌活性测定 ...... 23

2.2.2.7 化合物 A 的结构鉴定 . 23

2.３分离流程图.......... 23

三结果与分析......... 25

3.1 侧柏各器官乙醇提取物的抑菌活性比较.. 25

3.2侧柏各器官乙醇提取物的农用抑菌活性............ 26

3.2.1 侧柏叶乙醇提取物对 5 种植物病原真菌的毒力 26

3.2.2 对植物病原细菌的抑菌活性测定.......... 26

3.3 侧柏叶乙醇提取物抑菌活性物质的分离............ 27

3.3.1 侧柏叶乙醇提取物 3 种溶剂萃取物的制备..... 27

3.3.2 各萃取物的抑菌活性..... 27

3.4 乙酸乙酯萃取物的柱层析结果与分析...... 28

3.5 化合物 A 的抑菌活性测定 ........... 30

3.6 化合物 A 的结构鉴定....... 30

四结论........ 32

五讨论........ 33

5.1 侧柏中的抑菌活性物质有待于进一步研究........ 33

5. 2

8-甲基香豆素的抑菌活性有待深入研究 ........... 33

参考文献........ 34

致谢... 45

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