[毕业论文] 利用胡萝卜悬浮细胞表达aFGF的研究 [复制链接]

资料简介：

毕业论文-利用胡萝卜悬浮细胞表达aFGF的研究，共44页，21328字，附任务书、开题报告、文献综述、开题报告等

课题的内容和任务要求

研究内容：

载体的构建

胡萝卜悬浮细胞的遗传转化

阳性克隆的筛选和鉴定

任务要求：

1.通过查阅国内外相关资料了解国内外FGF的发展历程与应用现状；

2.熟悉利用胡萝卜悬浮细胞表达FGF操作流程；注意事项；

3.掌握多步PCR构建植物表达载体，农杆菌介导转化胡萝卜悬浮细胞，以及相关的电泳、dot杂交以及western杂交的实验

摘要: 为了降低aFGF的生产成本 ,结合植物生物反应器的优点 ,本文对aFGF在胡萝卜悬浮细胞中的表达进行了探索。[1]本研究通过植物转基因的手段，构建aFGF胡萝卜细胞表达载体，通过农杆菌侵染的方法，将aFGF克隆到胡萝卜悬浮细胞中进行表达。通过PCR检测及 Western blotting 检测表明本研究成功地将该片段转入植物细胞，目的蛋白能在培养基中分泌表达。

关键字：aFGF;胡萝卜悬浮细胞；植物生物反应器

中文摘要…………………………………………………………………………2

外文摘要………………………………………………………………………………3

引言……………………………………………………………………………………4

1．现状分析……………………………………………………………………4

1.1 考试模式现状……………………………………………………………4

1.1.1 传统考试模式及其特点…………………………………………………4

1.1.2 C/S模式考试系统及其特点……………………………………………4

1.2 考试系统建设…………………………………………………………………7

1.2.1 系统建设原则……………………………………………………………7

1.2.2 系统建设目标…………………………………………………………7

2．考试系统的相关技术介绍和分析………………………………………………8

2.1 Asp动态网站开发技术……………………………………………………8

2.1.1 ASP特点………………………………………………………………8

2.2 系统的运行环境和开发工具………………………………………………10

2.2.1 Windows 2000 Server和IIS …………………………………………10

3．考试系统数据结构……………………………………………………………14

3.1 系统分析－数据流图………………………………………………………14

4．中学信息技术考试系统结构设计框图………………………………………16

结束语……………………………………………………………………………40

注释………………………………………………………………………………40

参考文献……………………………………………………………………………42

致谢…………………………………………………………………………………43

二、课题关键问题及难点

1、植物表达载体的构建

2、成功利用农杆菌转化胡萝卜悬浮细胞，获得稳定遗传的整合有目的基因片段的植物细胞

3、单克隆细胞系的获得及其鉴定

三、完成该课题研究已具备的条件（有关的研究工作基础，仪器设备条件，经费情况）

本研究的实验部分是在生物与天然药物研究院进行的，实验室具备

PCR实验理论的发展和成熟，为载体构建提供坚实的基础。

利用根癌农杆菌介导的叶盘转化法转化油菜子叶和下胚轴，本研究团队已有丰富的经验，已在其他植物研究中具有成功的经历，不存在技术风险。

指导老师及其课题组在转基因植物研究为本课题的开展奠定良好的基础条件和加速相关科研成果的产业化，取得良好的经济和社会效益。

本课题的经费来自于温州市科技局项目。

5）本毕业设计所涉及的实验部分将在生物与天然药物研究院进行，该实验室具备从事本项目研究所需的设备条件，拥有基因表达、发酵、蛋白纯化、细胞分离与培养、生物材料制备与检测、植物组织培养、植物分子育种等系统的仪器设备。拥有流式细胞仪、PCR仪、发酵装置、高速冷冻离心机、紫外分光光度计、分离纯化设备、二氧化碳培养箱、LKB多用电泳仪、酶标检测仪、荧光显微镜、高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平、紫外透射反射分析、Elga超纯水系统、全自动酶标仪、离心冷冻干燥系统、快速蛋白液相色谱系统、倒置显微镜，高压电泳仪, 层析设备,高温高压灭菌器, 冷冻干燥仪, DNA测序仪，固液相分子杂交仪,超低温冰箱(-85℃),细胞培养室,基因枪，真空凝胶干燥器, 紫外透射仪, 日本OLYMPUS显微镜, 低温层析柜，大型光照培养箱（400立升）10台、高低压电泳仪各数台、大小型恒温摇床各1台、凝胶成像仪（UVP）、DNA杂交仪、高中压液相层析工作站等价值1000万元的设备。

四、研究方案

1. 拟采取的研究方法或试验方法及主要技术路线

(1)aFGF基因的扩增，酶切，链接，感受态，转化

(2)农杆菌介导转化胡萝卜悬浮细胞,共培养（培养基不加抗生素）、阳性克隆的筛选（培养基加抗生素）——悬浮细胞除菌后涂板，3-4周后挑选生长好的克隆扩大培养。

(3)鉴定：取培养好的细胞进行PCR，dot blot及western blot鉴定

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