资料简介：
硕士论文-毛皮动物病原菌耐药基因TEM-1和GyrA的核酸探针检测，61页，39402字
摘 要
随着毛皮动物养殖业的不断发展，毛皮动物细菌病的危害日趋突出，几乎每个养殖
场都发生过细菌病,给毛皮动物养殖业带来巨大的经济损失。目前，流行的细菌病主要
是大肠杆菌病、巴氏杆菌病、绿脓杆菌病和肠杆菌病等。兽医临床大量应用抗菌药物来
防治细菌病，且多不合理用药，导致毛皮动物致病菌耐药株不断增多，耐药谱不断扩大，
药物防治效果越来越差，给临床筛选抗菌药物和针对性治疗带来了困难，严重影响了毛
皮动物养殖业的进一步发展。
本研究通过调查山东省和安徽省部分地区毛皮动物细菌病流行现状，从患病动物组
织分离鉴定病原菌，结合细菌药敏试验，了解其耐药性。同时，扩增耐药基因 TEM-1
和 gyrA，并制备地高辛标记的核酸探针，用该探针对毛皮动物病原菌分离株进行斑点杂
交检测，明确耐 β-内酰胺类病原菌和耐氟喹诺酮类大肠杆菌在毛皮动物中的携带情况。
本研究从患病毛皮动物共分离到致病菌 51 株，通过生化反应鉴定，大肠杆菌 14
株（27.5%），金黄色葡萄球菌 8 株（15.7%），肠杆菌 7 株（13.7%），变形杆菌 6 株
（11.8%），巴氏杆菌 4 株（7.8%），枸橼酸杆菌 3 株（5.9%），绿脓杆菌 3 株（5.9%），
嗜血杆菌 2 株（3.9%），耶尔森氏菌 2 株（3.9%），志贺杆菌 1 株（2.0%），肺炎双球
菌 1 株（2.0%）。
42 株革兰氏阴性菌通过 K-B 法筛选出 34 株耐 β-内酰胺类细菌，占细菌分离株的
80.95%。大肠杆菌耐喹诺酮类细菌 8 株，占大肠杆菌分离株的 57.14%。药敏试验的结
果显示，半数以上细菌对磷霉素钠、先锋 V、头孢噻肟钠、庆大霉素、硫酸链霉素敏感，
对氨苄西林、青霉素、四环素、林可霉素表现出耐药性。
分别针对耐药基因 TEM-1 和 gyrA 设计引物，进行 PCR 扩增，产物大小分别为 301bp
和 169bp。对耐药基因片段进行地高辛标记，制备核酸探针，对此探针进行标记效率、
特异性、敏感性的检测。用地高辛标记的 TEM-1 基因片段作为核酸探针，对 42 株革兰
氏阴性致病菌进行斑点杂交，检出 38 株耐 β-内酰胺类菌株，阳性率为 90.48%。用地高
辛标记的 gyrA 基因片段作为核酸探针，对 14 株大肠杆菌临床分离株进行斑点杂交，检
出 7 株耐氟喹诺酮类大肠杆菌，阳性率为 50%。
本研究证实，毛皮动物细菌病耐药严重且多重耐药，应该引起兽医工作者的足够重
视。本研究建立了毛皮动物病原菌对 β-内酰胺类药物及氟喹诺酮类药物耐药性的核酸探
针检测方法，可以同时对大量样本进行检测，为临床合理使用抗菌药，有效防治毛皮动
物细菌病奠定了技术基础。
关键词：毛皮动物细菌病；TEM-1 基因；gyrA 基因；耐药性；核酸探针；斑点杂交
目录
摘要Ⅰ
英文摘要………………Ⅲ
缩略语表………………Ⅴ
第一章 文献综述………1
第二章 试验研究……15
前言15
试验一 毛皮动物病原菌的分离、鉴定及耐药性分析 …...… … …… 16
1 材料与方法…………16
2 结果与分析…………18
3 讨论…………………22
试验二
斑点杂交检测毛皮动物病原菌的 TEM-1 基因….…24
1 材料与方法…………24
2 结果与分析…………32
3 讨论…………………35
试验三 斑点杂交检测大肠杆菌的 GyrA 基因 …........… ………………37
1 材料与方法…………37
2 结果与分析…………39
3 讨论…………………42
结论43
创新点…………………44
参考文献………………45
资料文件预览：
共1文件夹，1个文件，文件总大小：1.39MB，压缩后大小：542.90KB
- 硕士论文-毛皮动物病原菌耐药基因TEM-1和GyrA的核酸探针检测
硕士论文-毛皮动物病原菌耐药基因TEM-1和GyrA的核酸探针检测.doc [1.39MB]
我要下载：毛皮动物病原菌耐药基因TEM-1和GyrA的核酸探针检测
