资料简介：
硕士论文-Insulin与FSH调控PGCs体外分化的卵母细胞发育的机理研究，共52页，31178字
摘要
哺乳动物卵巢卵母细胞发育的研究，最初主要关注生殖细胞形成的早期阶段或出生
后卵泡的生长发育。而原始卵泡的体外形成与发育激活方面，虽然有小鼠原始卵泡体外
培养发育并可获得成熟的卵母细胞的报道，但减数分裂前的雌性生殖细胞不能在体外完
成这一卵母细胞发生与成熟的整个过程。对于原始生殖细胞分化的研究来说，真正的挑
战是建立雌性原始生殖细胞的体外分化与发育体系，这对于开发卵母细胞资源并用于生
物和医学研究，了解原始卵泡形成与发育启动的调节机制等是至关重要的。
本研究主要是对 12.5 dpc 胎鼠卵巢进行体外培养 14 d，诱导卵巢卵母细胞的体外生
长发育，通过在培养液中添加低浓度 insulin (200~1000 ng/ml)、高浓度 insulin (5~20
μg/ml)、FSH (10~50 mIU/ml)或 ITS (insulin 1 mg/ml, transferrin 0.55 mg/ml, selenium 5
ng/ml) (0.5~2%)，来比较分析 insulin，ITS 和 FSH 对小鼠卵母细胞发生、原始卵泡形成
与发育激活的影响。胎鼠卵巢体外培养 10 d 时，开始看到有卵泡生成，添加 insuin 的试
验组中卵泡数很少(20±6.67~10±2.02 个/卵巢)。高浓度的 insulin 抑制卵泡的形成，随着
浓度的升高，次级卵泡的形成受到抑制，当达到 20 μg/ml 时，卵巢上没有出现次级卵泡。
添加 ITS 的试验组培养效果与添加 insulin 的试验组相似。体外培养 14 d 时，体外对照
组中卵巢卵母细胞直径为 45.75±2.44 μm，而单独添加高浓度 insulin 或低浓度 insulin 的
试验组直径为 38.45±3.15 μm、43.5±3.19 μm，添加 ITS 的试验组直径为 43.35±2.18 μm，
三个试验组卵母细胞直径都与对照组差异显著(p<0.05)。由上述可见，在本研究的试验
条件下，ITS 或 insulin 对于 12.5 dpc 胎鼠卵巢卵母细胞的生长发育是抑制的。
添加 FSH 的试验组，在体外培养 10 d 时，卵泡数目较多，与对照组差异显著，且
随着添加浓度的增大(10~50 mIU/ml FSH)，卵泡数量明显增加(33.2±11.22~56±11.16 个/
卵巢)。各级卵泡的比例变化基本相似。体外培养 14 d 时，添加 FSH 的试验组直径为
47.31±2.84 μm，与对照组差异显著(p<0.05)。然后，又检测了 FSH 与 ITS 或 insulin 的
联合作用，选择培养效果最好的因子添加剂量，检测结果显示卵母细胞直径分别达到
40.59±3.42 μm 与 41.75±3.24 μm，卵母细胞生长状况都不如对照组，且与对照组差异显
著(p<0.05)。本文中还检测了小鼠卵母细胞的特异基因等表达情况，发现体外发育的卵
母细胞的特异基因表达与正常小鼠的没有显著差异。由上述可见，在本研究的试验条件
下，在 12.5 dpc 胎鼠卵巢的体外培养中 FSH 对卵巢卵母细胞的发育是起促进作用的，
且 20 mIU/ml FSH 的试验组培养效果最好，同时，通过比较 20 mIU/ml FSH 与 1% ITS 或
20 mIU/ml FSH 与 5 μg/ml insulin 的相互作用，发现 FSH 与 insulin 两种因子之间的相互
作用抑制了卵母细胞的生长。ITS 与 insulin 可能都对 FSH 起抑制作用。
关键词：小鼠；原始生殖细胞；原始卵泡；卵母细胞；Insulin；FSH
目录
中文摘要......... 1
英文摘要......... 1
前言..... 1
第一部分 原始卵泡形成与早期卵泡发育的遗传调控....... 2
1 原始卵泡的形成与发育的启动...... 3
2 原始卵泡发育的分子调控. 4
2.1 KL 和 c-Kit 对原始卵泡发育的调控..... 5
2.2 GDF9 对原始卵泡发育的调节 ... 5
2.3 BMP-15 和 BMP-4 对原始卵泡发育的调节 ..... 6
2.4 KGF 对原始卵泡发育的调节 ..... 7
2.5 AMH 对原始卵泡发育的抑制作用 ........ 7
2.6 NOBOX 对原始卵泡发育的调控作用 ... 8
2.7 Foxl2 对原始卵泡发育的调控作用 ........ 8
2.8 其它生长因子对原始卵泡发育的调控作用...... 8
3 小鼠卵泡的体外培养与发育......... 9
4 其它哺乳动物卵泡的体外发育... 10
5 卵泡体外发育的应用前景........... 10
第二部分
insulin 与 FSH 调控 PGCs 体外分化的卵母细胞的发育..... 12
1 材料与方法........... 12
1.1 试验材料. 12
1.1.试验动物. 12
1.1.2 试验试剂.......... 12
1.1.3 试验仪器.......... 13
1.2 试验方法. 13
1.2.1 胎儿生殖嵴的获取...... 13
1.2.2 胎儿卵巢的体外培养.. 14
1.2.3 卵母细胞直径检测...... 14
1.2.4 RT-PCR 技术路线 ...... 14
1.2.5 组织切片的制作......... 16
1.2.6 统计分析.......... 16
2 结果与分析........... 17
2.1 胎儿卵巢的体内发育..... 17
2.2 高浓度 insulin 对胎鼠卵巢发育的影响 .......... 18
2.3 低浓度 insulin 对胎鼠卵巢发育的影响 .......... 18
2.4 ITS 对胎鼠卵巢发育的影响 ..... 18
2.5 FSH 对胎鼠卵巢发育的影响 .... 20
2.6 FSH 与 ITS 或 insulin 联合作用对胎鼠卵巢发育的影响 ...... 21
2.7 胎鼠卵巢体外培养中卵母细胞的直径变化.... 22
2.8 胎鼠卵巢体外培养中各级卵泡的比例变化.... 25
2.9 卵母细胞特异基因的表达检测. 28
3 讨论........... 28
3.1 胎鼠生殖嵴的体外发育. 28
3.2 insulin 对卵泡体外发育的作用 29
3.3 FSH 与 insulin 的互作 .. 30
结论... 33
参考文献....... 34
致谢... 39
个人简历....... 40
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