资料简介：
硕士论文-牛骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定试验，共61页，31602字
摘 要
目的：
本试验旨在分离、纯化牛 BMSCs，可以作为体细胞克隆的核供体细胞来源，
应用于动物遗传资源保存。
方法：
本试验共分为两个部分。试验 I：研究了不同月龄牛 BMSCs 分离培养的效
果。试验Ⅱ：采用全骨髓法和 Percoll 密度梯度离心法来分离纯化和体外培养
牛 BMSCs；并测定了原代及传代细胞的生长曲线；同时研究了不同培养基和血
清对 BMSCs 生长的影响；另外通过形态学观察、碱性磷酸酶染色和诱导分化三
种方法对 BMSCs 进行了初步鉴定。
结果
6 月龄组牛 BMSCs 的增殖能力高于 12 月龄组和 18 月龄组；6 月龄组原代
BMSCs 的克隆集落形成率显著高于 12 月龄组和 18 月龄组。6 月龄荷斯坦奶牛骨
髓中的 MSCs 适宜于分离培养。
全骨髓法与 Percoll 密度梯度离心法均获得了形态均一、细胞纯度较高的骨
髓间充质干细胞，第三代时其细胞纯度可达 99%以上。
对各代细胞进行形态学观察和瑞士-姬姆萨染色结果可以看出 BMSCs 各代之
间形态较一致；对其进行碱性磷酸酶染色阳性结果为阳性，证明了所得细胞为纯
度较高的 BMSCs；在体外诱导条件下能够分化为脂肪样细胞，初步证明了 BMSCs
具有分化潜能。
关键词：牛 骨髓间充质干细胞 分离 培养 初步鉴定
目录
摘要……..………Ⅰ
英文摘要…..……Ⅱ
英文缩写注释………………………..………Ⅲ
前言与综述…………………………...………1
前言…...…………1
骨髓间充质干细胞研究进展…...……………2
1 骨髓间充质干细胞的发现和研究历史………………...………………2
2 骨髓间充质干细胞的概念………………...3
3 骨髓间充质干细胞和骨髓基质细胞的异同..…………………………3
4 骨髓间充质干细胞的生物学形状…………………………...…………4
5 骨髓间充质干细胞的分离培养与扩增…………………………...……6
6 骨髓间充质干细胞的鉴定…………...……7
7 骨髓间充质干细胞的多向分化潜能…...…8
8 骨髓间充质干细胞的临床应用…………...11
9 骨髓间充质干细胞存在的问题和应用前景...…………………………14
试验内容…………...…………………………16
1 不同月龄牛骨髓间充质干细胞分离培养效果的研究……...…………...………………………….16
1.1 材料与方法…………………………....…16
1.1.1 材料………16
1.1.2 试验方法…17
1.2 结果与分析…19
1.2.1 不同月龄牛骨髓间充质干细胞原代培养观察结果………………19
1.2.2 不同月龄牛骨髓间充质干细胞传代培养观察结果………………20
1.2.3 不同月龄牛骨髓间充质干细胞的增殖能力………………………20
1.2.4 不同月龄牛骨髓间充质干细胞的集落形成率……………………21
1.3 讨论…………23
2 牛骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定…………...............…………24
2.1 材料与方法…24
2.1.1 材料………24
2.1.2 试验方法…24
2.2 结果与分析…………………………...…28
2.2.1 牛骨髓间充质干细胞原代培养形态学观察结果…..……………..28
2.2.2 牛骨髓间充质干细胞传代培养形态学观察结果…………………29
2.2.3 原代及传代牛骨髓间充质干细胞生长曲线………………………31
2.2.4 牛骨髓间充质干细胞的体外扩增速度33
2.2.5 瑞士-姬姆萨染色结果………………..33
2.2.6 碱性磷酸酶染色结果…………………35
2.2.7 牛骨髓间充质干细胞分化为脂肪 …..36
2.3 讨论…………37
2.3.1 骨髓间充质干细胞的分离和培养……37
2.3.2 骨髓间充质干细胞的生长特性………38
2.3.3 骨髓间充质干细胞染色………………39
2.3.4 牛骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞39
结论…...…………40
参考文献…………………………...…………41
附录...……………47
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