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jdk00 - 2013/9/11 19:13:33
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文件大小:1.82MB
适用专业:药学
适用年级:大学
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论文编号:207285

资料简介:

毕业论文-重组融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的生物学活性检测,共51页,21029字,附任务书、开题报告、文献综述、开题报告等

课题的内容和任务要求

1. 课题的研究内容

(1)Lowry试剂法检测TAT-HA-aFGF27-154蛋白溶液的浓度;

(2)建立3T3细胞活性检测体系;

(3)MTT法检测融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154和HA-aFGF27-154促3T3细胞增殖作用;

(4)计算出TAT-HA-aFGF27-154的活性单位。

2. 课题的任务要求

(1)建立融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的细胞生物学活性检测模型;

(2)摸索融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的最佳治疗浓度;

(3)以HA-aFGF27-154融合蛋白作为对照,探讨穿膜肽TAT作为药物载体对aFGF27-154活性的影响。


摘 要:目的:对早期表达的融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154进行细胞活性检测,找出最佳的药物浓度,为进一步的生物学应用提供理论基础。方法:纯化得到的融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154通过超滤除盐并浓缩,冻干后于-80℃保存备用。体外培养3T3细胞,MTT法检测融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的活性。结果:表达、纯化得到的融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154去除了野生型aFGF对NIH/3T3细胞的分裂活性,在低浓度条件条件下,对NIH 3T3细胞没有明显的促增殖作用。在外源加入肝素的刺激下,相同浓度的融合蛋白促NIH/3T3细胞分裂的活性增加,其促增殖活性呈浓度依赖性。结论:本研究成功建立融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的体外测活方法,为利用TAT作为药物载体,以及非促分裂型aFGF应用于临床提供有效方法。

关键词:MTT法;细胞测活;促增殖活性


目 录

中文摘要………………………………………………………………………………5

外文摘要………………………………………………………………………………6

引言……………………………………………………………………………………7

1.材料………………………………………………………………………………7

1.1 融合蛋白和细胞………………………………………………………………7

1.2主要试剂………………………………………………………………………7

1.2.1细胞培养相关试剂………………………………………………………7

1.2.2 主要仪器设备……………………………………………………………7

2.实验步骤………………………………………………………………………8

2.1 融合蛋白的除盐与浓缩……………………………………………………8

2.2 融合蛋白的冻干……………………………………………………………8

2.3 3T3细胞的培养……………………………………………………………8

2.4 MTT测活……………………………………………………………………8

2.5 统计学分析…………………………………………………………………9

3.实验结果………………………………………………………………………9

3.1 3T3细胞的体外培养………………………………………………………9

3.2 融合蛋白的MTT测活………………………………………………………9

4.讨论……………………………………………………………………………14

参考文献……………………………………………………………………………16

致谢…………………………………………………………………………………18


研究方案

1. 拟采取的研究方法或试验方法及主要技术路线

研究方法

Lowry试剂法检测融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的浓度;

3T3细胞的培养;

MTT法检测融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的活性;

计算出融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的活性单位。

技术路线

Lowry试剂法检测融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的浓度→3T3细胞的培养

→MTT法检测融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的活性→计算出融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的活性单位


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